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模型动物小课堂(一):常用6个动物模型SOP

辽宁长生生物技术股份有限公司

2021/10/26 11:50:56
  1、肺纤维化模型
 
  大鼠肺纤维化模型
 
  SD大鼠,鼠龄6-8周龄,体重200g左右,气管内给药。称重大鼠,麻醉后将大鼠仰卧固定于实验台,切开颈部的皮肤,钝性分离颈部的肌肉,充分暴露气管,行气管切开术,模型组(BLM组)缓慢注人5 mg/kg BLM  0.1mL,立即旋转动物,使药液在肺内均匀分;对照组同上方法注入生理盐水0.1 ml,分笼饲养,自由饮水。期间动物会出现背毛凌乱,体重减轻现象,会有少量死亡现象。
 
  模型鉴定
 
  造模14天后,可进行肺部CT观测。
 
  HE与MASSON肺组织病理检测观察
 
  小鼠肺纤维化模型
 
  成年雄性ICR小鼠,体重25-28g,气管内给药。称重小鼠,麻醉后将小鼠仰卧固定于实验台,切开颈部的皮肤,钝性分离颈部的肌肉,充分暴露气管,行气管切开术,模型组(BLM组)缓慢注人5 mg/kg BLM  50 μl,立即旋转动物,使药液在肺内均匀分;对照组同上方法注入生理盐水50 μl,分笼饲养,自由饮水。期间动物会出现背毛凌乱,体重减轻现象,会有少量死亡现象。
 
  2、溃疡性结肠炎模型
 
  小鼠溃疡性结肠炎模型
 
  6-8周雄性C57BL/6小鼠,予3%DSS常饮法造模,给DSS14天(小鼠每只/天饮水量大约是5ml),构建小鼠结肠炎模型。在 UC 造模期间,每天称取小鼠体重,观察小鼠粪便稠度及出血情况,进行 DAI评分,分别就体重降低、粪便稠度、出血三个参数计算 DAI,DAI=(体重评分+粪便稠度评分+出血评分)/3
 
  (a)体重减少%=[-(实验当天的体重-原始体重)/原始体重*100,0分≤1%,
 
  1 分=1%-5%,2 分=5%-10%,3 分=10%-15%,4 分≥15%];
 
  (b)粪便稠度(0 分:粪便正常,2 分:粪便稀松,4 分:腹泻);
 
  (c)出血(0 分:阴性未发现,出血情况,2 分:阳性发现出血情况,4
 
  分:发现严重出血情况).
 
大鼠溃疡性结肠炎模型
 
  雄性Wistar 大鼠200-230g,予5%DSS常饮法造模,给DSS14天,构建小鼠结肠炎模型。在 UC 造模期间,每天称取大鼠体重,观察大鼠粪便稠度及出血情况,进行 DAI评分,进行 DAI评分,分别就体重降低、粪便稠度、出血三个参数计算 DAI,DAI=(体重评分+粪便稠度评分+出血评分)/3
 
  (a)体重减少%=[-(实验当天的体重-原始体重)/原始体重*100,0分≤1%,
 
  1 分=1%-5%,2 分=5%-10%,3 分=10%-15%,4 分≥15%];
 
  (b)粪便稠度(0 分:粪便正常,2 分:粪便稀松,4 分:腹泻);
 
  (c)出血(0 分:阴性未发现,出血情况,2 分:阳性发现出血情况,4
 
  分:发现严重出血情况).
 
  3、慢性心衰模型
 
  大鼠慢性心衰模型
 
  Wistar雄性大鼠200g-250g,适应性喂养1周后,阿霉素腹腔注射给药2.5mg/kg/周,连续给药6周,超声心电图记记录以下血流动力学参数:心率(HR)、左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)、舒张压(DAP)、收缩压(SAP)、平均动脉压(MAP)、左室压力最大上升及下降速度(±dp/dtmax)进行测定。
 
  小鼠慢性心衰模型
 
  体重在25-30g之间的雄性C57BL/6J小鼠,适应性喂养1周。小鼠在建立模型前8小时禁止饮水及进食,每一只小鼠都要称体重并记录下体重值,模型组给予盐酸阿霉素 (辉瑞制药有 限公 司)腹腔注射 ,2mg/kg,前 5次每 3d注射1次, 以后每 7d注射 1次 ,累计用量 22mg/kg。给药10周。采用超声心动图检测小鼠心脏功能:心率(HR)、左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)、舒张压(DAP)、收缩压(SAP)、平均动脉压(MAP)、左室压力最大上升及下降速度(±dp/dtmax)。
 
  4、癫痫模型
 
  大鼠癫痫模型
 
  9周龄健康雄性SD大鼠,海马区脑立体定位注射20 mM海人酸1μl构建癫痫模型,注射海人酸后即可观察大鼠行为,观察时间是4h。海人酸注射大鼠发生的痫性发作按Racine分级标准进行判定:0级,无惊厥;I级,咀嚼、眨眼、立须等面部肌肉抽搐;II级,以点头运动为主的颈部肌肉抽搐;III级,单侧前肢阵挛、抽搐;IV级,双侧前肢阵挛、抽搐伴身体立起;V级,双侧后肢强直,身体背曲强直,跌倒伴全身阵挛。0级为正常,I-III级为癫痫部分性发作,IV~V级为癫痫大发作;凡在观察时间内连续出现3次IV~V级发作者即为成功癫痫模型。
 
  小鼠癫痫模型
 
  8-10周健康雄性C57BL/6小鼠,将小鼠置于立体定位仪上,根据预实验摸索并优化麻醉剂用量、海人酸注射量和注射部位的各参数,得到以大脑Bregma为原点的海马定位注射坐标:-2.0、-1.8、-2.3 mm(右侧海马),进行单侧注射海人酸12 mg/kg后,观察其行为表现。以在急性期出现持续l h以上的III 级以上发作,即为成功癫痫模型。
 
  5、帕金森模型
 
  大鼠帕金森模型
 
  选取雄性 SD 大鼠 ,体质量 250 ~300 g,进行脑立体定位手术,麻醉后,将大鼠头部固定于脑立体定位仪,颅骨暴露出 2 点,脑黑质坐标:(1)anterior-posterior(AP): 5.2 mm; medial-lateral (ML): 1.9 mm; deep ventral(DV): 8.2 mm, (2) AP: 5.5 mm; ML: 2.4 mm; DV: 7.6 mm,并注入药物,正常对照组每侧注入含0.2%抗坏血酸 0.9%氯化钠注射液 3 μl,6-OHDA 处理实验组每侧注入浓度为 2.5mg/ml 的6-OHDA 溶液3 μl(溶剂为含0.2%抗坏血酸 0.9%氯化钠注射液)。
 
  鉴定:(1)大鼠经 6-OHDA 损毁两周后,在黑暗安静的环境下腹腔注射 APO 溶液(1mg·kg-1),单独置于笼内,观察其行为变化,5min 后开始计算旋转圈数,以向
 
  健(左)侧、首尾相接、环曲 360°者计一圈,记录 5min,若旋转>7r·min-1 或>35r·5min-1(*毁损)视为建模成功;旋转<7r·min-1 或<35r·5min-1(部分毁 损)及 15min 无旋转或向右侧旋转者均视为建模失败;(2)HE染色观察脑组织病理学变化
 
  小鼠帕金森模型
 
  C57BL / 6 雄性小鼠,8 周龄,体质量 20 ~ 22 g,小 将动物固定在立体定位仪(上,沿颅 顶矢状缝切开皮肤,暴露前囟( Bregma)。 在前囟前 (AP)+0. 5 mm,中线旁(ML) -2. 0 mm(右侧) 打孔。 微量进样器缓慢下行,先后分别在 颅骨下(DV)-3. 0 mm 和-2. 0 mm 各注入 6-OHDA 溶 液 0. 78 μL,速度 0. 5 μL·min-1 ,每次注射完成后需 留针 3 min。 匀速退出进样器,缝合处理创面。
 
  鉴定:术后的 5 周中,每周腹腔注射 0. 125 g·L-1 的 APO(0. 5 μg·g-1 )观察动物旋转情况。 将动物放置在 500 mL 的烧杯里,杯底附新鲜干燥垫料,计数 30 min 内,小鼠向未损伤侧的旋转圈数,每旋转 360 度记为 1 圈。 统计结果以旋转次数(rotation·30 min-1 )表示。
 
  6、糖尿病模型
 
  大鼠二型糖尿病模型
 
  8周龄雄性SD大鼠(200g左右),用高脂高糖饲料喂养4周后禁食12小时,腹腔注射配制好的链脲佐菌素溶液30 mg/kg,连续注射3天。4天后检测空腹血糖值,当空腹血糖≥ 11.1mmol/L时,并且高血糖持续两周且无恢复现象者可作为成功模型。
 
  小鼠二型糖尿病模型
 
  C57BL/6 雄性小鼠(20g左右),用高脂高糖饲料喂养4周后禁食12小时,腹腔注射配制好的链脲佐菌素溶液30 mg/kg,连续注射3天。4天后检测空腹血糖值,当空腹血糖≥ 11.1mmol/L时,并且高血糖持续两周且无恢复现象者可作为成功模型。
 
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