【FACSCelesta实验应用系列】之全血NKT检测
【实验概述】
NKT细胞是一类新型的免疫调节细胞，在外周血中比例极低，但NKT细胞能增强免疫反应，在抗肿瘤、抗感染、抑制自身免疫病及移植耐受中可发挥重要作用，因此人全血NKT的检测在疾病诊断中具有重要作用，流式细胞仪是检测NKT最佳方法之一，且NKT在全血中比例较低，全血不破红直接检测NKT同时也是判断流式细胞仪检测极低含量细胞能力的实验方法之一。
【实验方法】
①/ 仪器配置
| Flow cytometer | Laser |
| FACSCelesta | 488nm Blue Laser 640nm Red Laser |
②/ 配色方案及流式试剂
● 配色方案
| CD3 | CD56 | CD45 | CD235a |
| FITC | PE | PerCP-Cy5.5 | APC |
● 流式试剂
| Products Name | Catalog No. | Clone | Size | Vol.per.Test |
| BD Pharmingen™ FITC Mouse Anti-Human CD3 | 555332 | UCHT1 | 100 Test | 5ul |
| BD Pharmingen™ PE Mouse Anti-Human CD56 | 555516 | B159 | 100 Test | 5ul |
| BD Pharmingen™ PerCP-Cy™5.5 Mouse Anti-Human CD45 | 564105 | HI30 | 100 Test | 5ul |
| BD Pharmingen™ APC Mouse Anti-Human CD235a | 551336 | GA-R2 (HIR2) | 0.1 mg | 20ul/100ul Whole Blood |
| BD Pharm Lyse™ Lysing Buffer (10x ) | 555899 | 100ml |
【实验结果】
人全血中红细胞比例最高，可用对应抗体CD235a将其区分，而NKT比例低，在此样本中，NKT群与其他细胞群区分明显，可清楚区分开，其比例约为万分之一，需收集bai万级别的细胞数，但因红细胞数目众多，以低速（14ul/min）的上样速度上样，检测速度即可达到18000 events/s左右，所以此试验同时也验证了流式细胞仪在高速高浓度样本的检测中的液流稳定性及信号丢失率。
* 本资料仅限科研用途使用
