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第一就是要稀释。我们要留血浆（肝素钠抗凝的采血管采的血，5～6ml），所以分离、取出血浆后加入和红细胞等体积的生理盐水，一般3ml左右，混匀。

第二，分离液不在乎体积有多少，主要是高度，如果离心管很粗的话（呵呵，挺吃亏的），就要多加一些，细一点的离心管就可以少加一些，一般高度要超过3cm。

第三，看你要分离的血是什么来源的，成人外周血比较好分，脐血和胎盘血不好分。当然，发生溶血和凝血的话就更难分了。

第四，血的保存很重要，采血后不要放到4度冰箱（当然更不能冻啦），常温，避光即可。从采血到分离不要超过12个小时，不然效果也不好。

第五，就是离心的速度和时间。不同的离心机，肯定转速不一样的，我们实验室一般用水平离心机2500转，20分钟，基本上没有红细胞了，淋巴细胞也很多。这一条要自己多试试。

第六，淋巴细胞分离液的保存不必放在4度，常温即可，无论是否开封了的。我们试过，分离液一放到4度后，无论复温的效果如何，分离的效果都没以前好。

1.用0.85%生理盐水对倍稀释抗凝血液标本。

2.取淋巴细胞分离液3-4ml于干净试管中。

3.往淋巴细胞分离液上层缓缓加入2倍于分离液体积的稀释外周血量。

4.2000-2500RPM转速离心15分钟。

5.用吸管吸取中层白色浑浊液于eppendorf管-20℃保存待用。

注意事项：

1、取血的质量很重要，分离界面清楚的总是血样质量好的（实验室人自己献的），我们用Hanks对倍稀释!分离液一般是稀释血量的1/2！

2、离心时间很有关系各实验室离心机不同，自己摸索一下就好了！

3、破碎红细胞我们用双蒸水少于一分钟。

4、试管的干净程度也有关系的。