抗体问题一直困扰着广大科研工作者，抗体市场鱼龙混杂，虽然是一个名字但是每个对应的质量都是不同的，今天给大家分享一些抗体选择的经验~ 检测任何目的靶蛋白都不止一种抗体可供选择，为缩小抗体的选择范围选中合适的抗体，需要考虑如下几种因素：
1、分析或应用的类型
一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型，如：可以应用于 WB IHC ICC ELASA 分析等，如果抗体说明书没有提及的应用类型，并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型，而仅是说明尚未经过此种分析试验验证，如果抗体不适用某些分析试验，则会在抗体说明书上标注出来不适于某分析试验。
2、样本蛋白的结构性质
了解样本蛋白的结构性质有助于挑选最适宜的抗体，至少两方面要素需求考虑待测样本蛋白的结构域：抗体是由各种不同免疫原免疫宿主而制备得来，其间的免疫原包含：全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体或细胞，抗体阐明书一般都有免疫原的描述，假如计划检测的是蛋白片断或一种特别的同型物或蛋白全长的某一区域，则有必要挑选用含此片段域的免疫原制备出的抗体。假如计划用 FACS 流式检测活细胞的外表蛋白，则需求挑选含该外表蛋白的胞外域来免疫制备的抗体。
样本的提取或处理过程：某些抗体要求样本经过某些特别处理，例如：许多抗体只辨认复原和变性的、表位已暴露不受二级四级结构阻止的蛋白样本，另一方面，某些抗体仅辨认天然折叠状态的蛋白。当挑选免疫组化的抗体时，应留意某些抗体只辨认未固定的冷冻的安排，而另一些抗体则适用于无需抗原修正的甲醛固定石蜡包埋的安排，这些都会在抗体阐明书上运用部分标明出来。
3、样本的物种
应挑选物种相同或有交叉反响的抗体，抗体可能与不同物种的同种靶蛋白有交叉反响，因其氨基酸序列同源性较高，假如样本的品种未列入抗体阐明书上的交叉反响种属表中，并不意味着该抗体不适用于检测该物种的蛋白，而只是表示该物种没有用此抗体检测验证过，应通过序列比对的办法来预测交叉反响，可运用 Expasy 和 NCBI BLAST 来进行不同物种蛋白同源性比对。
4、抗体宿主的品种
一抗的挑选：
一般说来，在运用偶联二抗结合无偶联物的一抗时，一抗宿主动物的物种挑选较为重要，对于免疫组化而言，尽可能挑选与样本不同种系物种的一抗，从而避免二抗与样本内源性免疫球蛋白产生交叉反响，例如：检测小鼠样本蛋白，则不应挑选小鼠或大鼠源的一抗，选兔源的一抗，则二抗则可挑选偶联了检测分子的抗兔 IgG。
假如挑选有偶联物的一抗则不适用上述情况，除免疫组化外的其它对不含内源性免疫球蛋白样本的检测办法，则抗体宿主物种的影响不大，如对不含 IgG 的细胞裂解物样本的 western blotting 检测，尽管如此，含有血清的安排裂解物和安排培养上清中含有免疫球蛋白，复原变性样本中含IgG，在western blot 检测中则结合呈现 IgG 分子50 and 25 kDa 的重链和轻链条带。
二抗的挑选：
二抗应选用与运用的一抗相同的物种来源，例如：假如你的一抗是小鼠的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的二抗 anti-mouse secondary 。建议检查二抗阐明书保证该抗体适用于你的检测运用， 二抗一般连接荧光素 FITC 或发光团。
两层染色抗体的挑选：
两层染色抗体的挑选用未偶联一抗进行细胞培养物或安排切片的两层免疫染色要求一抗来源于不同物种而且二抗分别辨认其间之一，二抗阐明书应描述其与其它物种来源的免疫球蛋有否有交叉吸附。
5、荧光和化学发光标记
连接于二抗的标记物是为了检测抗体的结合，选择标记物依赖于几个参数：检测方法：荧光或着色沉淀，荧光标记物用特殊波长的光激发时发射出可见光，下表列出了几种荧光素的分子特征：
二抗连接标记酶HRP and AP 与其底物产生有颜色的沉淀物
封片介质（仅免疫组化），AEC、Fast Red、INT 或其它水性发光基团是可以醇溶的并要求水性封片。除上述之外的发光基团是有机的所以最好使用有机性封片介质。
荧光素标记物要求水性封片介质，藻红蛋白(藻青素 / 藻红素要求不添加甘油的水性封片介质，因其有淬灭荧光的效应。
生物素化的抗体通常用于加强亲和素-生物素-酶或荧光素复合物（ABC 试剂 或亲和素或链霉亲和素连接酶或荧光素的信号）
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