伊红美蓝培养基(EMB)的使用方法与应用！
一、背景
伊红美蓝培养基(EMB)用于分离革兰氏阴性肠道菌特别是大肠菌群和粪大肠菌群(GB/T4789.38-2008，GB15979-2002，SN0169-92，化妆品卫生规范2007版和GB5750.12-2006)。
二、原理
当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色，再与美蓝结合形成紫黑色菌落，并带有绿色金属光泽。而产气杆菌则形成呈棕色的大菌落。
在碱性环境中不分解乳糖产酸的细菌不着色，伊红和美蓝不能结合，故沙门氏菌等为无色或琥珀色半透明菌落。金葡菌在此培养基上不生长。
常用的伊红美蓝乳糖培养基，可用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌。如果有大肠杆菌，因其强烈分解乳糖而产生大量的混合酸，菌体带H+，故菌落被染成深紫色，从菌落表面的反射光中还可以看到金属光泽。
三、使用方法
1、制作伊红美蓝培养基，趁热注入培养皿中，凝成平板，待用。
2、用灭过菌的锥形瓶盛取河水或沟水，按1：10稀释。
3、取0.1毫升稀释液接种于伊红美蓝培养基上。用平板划线分离法进行分离。
4、将划线后的培养皿倒置37℃温箱中培养18～24小时。培养基中会出现大肠杆菌菌落，菌落中心呈暗蓝黑色，发金属光泽。
5、将菌落接种于斜面培养基上（由营养琼脂培养基制成）。
四、应用
用于鸡大肠杆菌噬菌体的分离鉴定及初步应用研究：
从某大型养鸡场采集粪便样品，分离、纯化、鉴定多株大肠杆菌，利用分离纯化的大肠杆菌为宿主菌，从粪便中分离对应噬菌体，并对其中一株噬菌体进行生物学特性的测定。
用筛选到噬菌体的所有大肠杆菌菌株，通过饮水、腹腔注射等不同途径对鸡进行攻毒，建立和优化鸡大肠杆菌病动物模型。利用相应噬菌体通过口服、腹腔注射等不同方式对鸡大肠杆菌病进行治疗性试验，验证治疗效果，为鸡大肠杆菌噬菌体的临床应用提供依据。大肠杆菌的分离鉴定。
从某大型养鸡场采集粪便样品，放入生理盐水中搅拌，上清经平板划线法依次在麦康凯琼脂培养基、伊红美蓝培养基上进行分区划线，并将得到的单个菌落在伊红美蓝培养基上进行纯化。
然后，将纯化后的大肠杆菌经革兰氏染色、微量生化反应进一步鉴定。共从粪便中分离纯化20株大肠杆菌，所有菌株在麦康凯琼脂培养基呈红色或粉红色，在伊红美蓝培养基上呈暗紫色且带有绿色金属光泽；经革兰氏染色，光学显微镜下拍照观察，菌体呈红色、短杆状；采用细菌微量生化反应管对各菌株进行生化鉴定，显示各菌株为大肠杆菌。噬菌体的分离鉴定。
以分离的20株大肠杆菌为宿主菌，采用双层琼脂平板法从粪便中分离噬菌体，结合液体增殖法将噬菌体进行纯化；采用点滴法对所分离噬菌体进行宿主交叉感染试验；将富集的Bp5、Bp6噬菌体用2%磷钨酸进行负染，利用透射电镜观察噬菌体的形态。
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