无菌检测隔离器的操作对手套的使用操作频繁，工艺过程中常常会用到剪刀、针头或注射器，包括西林瓶铝盖的开封口，这些都会增加手套破损和加速老化。尤其是在手指部分。因此手套的完整性需要在操作前后进行检查。
手套的检查方法有两种：
(1)目测是简单，也最便利的测试方法。一般将手套最容易损坏的部位进行适当的拉伸，检查是否有明显破损。同时检查手套是否有龟裂、老化现象。
(2)手套检漏仪，利用保压法来对手套进行检查。
手套的完整性检查需要日常记录。
通常在佩戴隔离器手套之前，操作者会先佩戴一层无菌手套。在国外的实际应用中，有的操作者会在隔离器的手套外再戴一副无菌手套。下图为在隔离器的手套上在戴一层无菌手套。
手套在灭菌过程中，应该使用手套支撑架将手套撑开，确保手套表面能充分的暴露在灭菌气体中。验证时候需要在手套手指部分也贴上指示剂。
一般建议手套根据使用情况定期更换，尽量避免在无菌检查过程中去更换。如果在操作过程中发现手套被针头扎破，如果不是很大的破损，隔离器没有报警生成，则建议首先记录这个事件发生的时间，操作的供试品编号或者培养罐编号;同时可以在破损处做一个表面微生物留样，然后戴一层无菌手套，继续做测试。
隔离器的使用是一个熟悉和认知的过程，操作者需要充分了解在隔离器操作中的限制性，在正式测试前，多做几次模拟，形成一个合理的SOP，并且考虑无菌检查过程中可能出现的突发状况，在隔离器中的处理方式。在不断的实践中更好的完善操作工艺。
