冷冻细胞活化步骤-化工仪器网-手机版

1.冷冻细胞的活化原则为快速解冻，避免冰晶重新结晶对细胞造成伤害，导致细胞死亡。

2.细胞活化后，约需数日，或继代一至二代，其细胞生长或特性表现才会恢复正常(例如产

生单株抗体或是其它蛋白质)。2y2Q O6\#o&h4@+z,~

3.材料37℃ 恒温水，新鲜培养基，无菌吸管/离心管/培养瓶，液氮或干冰容

4.步骤：

4.1操作人员应戴防护面罩及手套，防止冷冻管可能爆裂之伤害。

4.2自液氮或干冰容器中取出冷冻管，检查盖子是否旋紧，由于热胀冷缩过程，此时盖子易

松掉。

4.3将新鲜培养基置于37°C水槽中回温，回温后喷以70%酒精并擦拭之，移入无菌操作台内。

4.4取出冷冻管，立即放入37°C水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化以70%ethanol擦拭保存管外部，移入无菌操作台内。

4.5取出0.9ml解冻之细胞悬浮液，缓缓加入有培养基之培养容器内(稀释比例1:10～1:15)混合均匀，放入CO2培养箱培养。另取0.1ml解冻细胞悬浮液作存活测试。

4.6解冻后是否立即去除冷冻保护剂(例如DMSO或glycerol)，依细胞种类而异，一般而言大都不需要立即去除冷冻保护剂。惟若要立即去除，则将解冻之细胞悬浮液加入含有5-10ml培养基之离心管内，离心1,000rpm,5分钟，移去上清液，加入新鲜培养基，混合均匀，放入CO2培养箱培养。

4.7若不需立即去除冷冻保存剂，则在解冻培养后隔日更换培养基。

冷冻细胞活化步骤