Gilson固相萃取仪将固相萃取的各个步骤有效的集成于一个平台,可*实现整个固相萃取过程(活化、上样、淋洗、干燥、洗脱)的全自动操作,大大提高了样品前处理的效率,将分析工作者从繁琐的前处理工作中解脱出来,使样品前处理更快捷、高效。
Gilson固相萃取仪操作流程:
1.选择小柱或滤膜
小柱或滤膜的大小与规格应视样品中待测物的浓度大小而定。对于浓度较低的体内样品,一般应选用尽量少的固定相填料萃取较大体积的样品。
2.活化
萃取前先用充满小柱的溶剂冲洗小柱或用5-10ml溶剂冲洗滤膜使填料保持湿润,因为填料干燥会降低样品保留值,而各小柱的干燥程度不一,也会影响回收率的重现性。
3.上样
一般可采取以下四种方法:
(1)用0.1mol/L酸或碱调节,使pH<3或pH>9,离心取上层液萃取;
(2)用甲醇、乙腈等沉淀蛋白质后取上清液,以水或缓冲液稀释后萃取;
(3)用酸或无机盐沉淀蛋白质后取上清液,调节pH值后萃取;
(4)超声15min后加入水、缓冲液,取上清液萃取。流速应控制为1ml/min,流速快不利于待测物与固定相结合。
4.淋洗
反相SPE的清洗溶剂多为水或缓冲液,可在清洗液中加入少量有机溶剂、无机盐或调节pH值。加入小柱的清洗液应不超过一个小柱的容积,而SPE滤膜为5~10ml。
5.洗脱
应选用5~10ml离子强度较弱但能洗下待测物的洗脱溶剂。若需较高灵敏度,则可先将洗脱液挥干后,再用流动相重组残留物后进样。体内样品洗脱后多含有水,可选用冷冻干燥法。保留能力较弱的SPE填料可用小体积、较弱的洗脱液洗下待测物,再用极性较强的HPLC分析柱分析洗脱物。