柱层析被描述为一种色谱常用的技术，其中待分离的物质被置于装有吸附剂（固定相）的柱子的最高点上，以不同的速率通过柱子，这取决于每种物质对吸附剂的亲和力。吸附剂和溶剂或溶剂混合物，并且通常在不同时间从柱中通过时聚集在溶液中。
两种最常见的柱色谱固定相是硅胶和氧化铝，而有机溶剂被认为是最常见的流动相。
一、柱层析原理
柱层析的主要原理是在固定相的帮助下吸附溶液中的溶质，然后将混合物分离成独立的成分。当流动相与需要分离的混合物一起从色谱柱顶部进入时，混合物中的各组分以不同的速率运动。
与对固定相的较大吸附性和亲和力相比，对固定相具有较低吸附性和亲和力的组分会更快地排出。运动较快的成分先被取出，而运动慢的成分最后被洗脱出来。
组件的移动速度如下所示：
R f = 溶质通过的距离/溶剂通过的距离
其中R f称为延迟因子
二、色谱柱组件
使用气体或液体流动相的典型色谱系统的组件包括：
固定相——通常是一种具有良好吸附性能的固体材料，应适合待分析物的分离。它不应对流动相的流动造成任何阻碍。
流动相和输送系统——该相由补充固定相的溶剂组成。
流动相充当溶剂、显影剂（促进样品中组分的分离以形成条带）和洗脱剂（去除在实验期间分离的色谱柱组分）。
三、色谱柱
液相色谱柱：长2-50cm，内径4mm，不锈钢制造；恒谱生提供各种长度和内径的制备分析柱，C18色谱柱能够适用于分离具有不同疏水性的分析物，是用途广泛的通用型硅胶色谱柱。
气相色谱柱：长 1-3m，内径 2-4mm，由玻璃或不锈钢制成。
色谱柱的材料及其尺寸对于支持固定相和促进有效分离非常重要。制备液相色谱柱通常用10、20、30甚至更大的尺寸，因为它需要很大的进样量。恒谱生也同样提供各种型号的色谱空柱管，比如φ4.6 × 50、φ4.6 × 150、φ4.6 × 250等。
四、其他
进样器系统——负责以可重复的方式将测试样品输送到色谱柱顶部。
检测器和图表记录器——这可以连续记录洗脱液中分析物从柱中流出时的存在情况。
检测依赖于物理参数的测量（如可见光或紫外线吸收）。
在图表记录器上，每个分离的分析物都由一个峰表示。
底部的收集器放置在色谱柱的底端，用于收集分离的分析物。
五、柱层析程序
柱层析包括的步骤是：
色谱柱的制备，大多数情况下，色谱柱由带有适当固定相的玻璃管组成；
柱底端填充玻璃棉/棉绒或石棉垫，然后填充固定相。装柱后，在顶部放置一个纸盘，以避免在引入样品或流动相过程中对固定相的干扰。固定相（吸附层）的干扰导致不规则的分离带。
两种类型的制备柱，称为填料技术，即：
干装技术 –将所需量的吸收剂以细干粉形式添加到色谱柱中，溶剂自由流过色谱柱直至达到平衡。
湿法填料——吸附剂浆液与流动相一起制备并倒入柱中。它被认为是包装的理想技术。
色谱柱在使用前应适当清洗并*干燥。
六、样品介绍
样品（组分的混合物）溶解在最少量的流动相中。在某一时刻，样品被引入色谱柱并在色谱柱的顶部被吸收。通过洗脱过程，可以将单个样品从该区域中分离出来。通过洗脱技术，各个组分*从色谱柱中分离出来。
洗脱过程可以通过使用两种技术进行：
等度洗脱技术——在整个过程中，使用相同极性或相同溶剂组成的溶剂。
梯度洗脱技术——在整个分离过程中，使用极性逐渐增加或洗脱强度逐渐增加的溶剂。
七、成分检测
如果在柱层析过程中分离的混合物是有色化合物，那么监测分离过程很简单。如果进行分离的化合物是无色的，则将小部分洗脱液依次收集在标记的试管中。通过 TLC，可以确定每个馏分的组成。
