物质本身性质决定,光的波长,溶液浓度,浓度越大,吸光度越大,溶液厚度,越厚,吸光度越大.
1、 受有色物质稳定性的影响；
2、受比色皿洁净度和配对性的影响；
3、受参比溶液版选择权的影响；
4、受仪器波长精度的影响；
5、受分光光度计稳定性的影响；
6、受仪器吸光度测定准确性的影响；
7、受检测人员技术水平的影响；
8、受显示溶液配制浓度误差的影响。
一、样品的稀释浓度
样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素，由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒，尤其是核酸样品。这些小颗粒的存在干扰测试效果。为使较大程度减少颗粒对测试结果的影响，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值在0.1-1.5A。在此范围内，颗粒的干扰相对较小，结果稳定。从而意味着样品的浓度不能过低，或者过高(超过光度计的测试范围)。
二、核酸本身物化性质
溶解核酸的缓冲液的pH值、离子浓度等在测试时，离子浓度太高也会导致读数漂移，因此建议使用pH值一定、离子浓度较低的缓冲液(如TE)可大大稳定读数。核酸的吸光值受pH值和缓冲液离子浓度影响。只有在一定的pH值和低离子浓度的条件下(如10mMTris-HClpH8.0)，才能得到精确的检测结果。水的pH值不稳定，可能导致检测误差。一些缓冲液在紫外范围内存在自身吸收，为了确保准确测量，请使用与悬浮或洗脱样品时相同的缓冲液。
三、分光光度计操作因素
1、使用仪器前，使用者应该首先了解本仪器的结构和工作原理，以及各个操纵旋钮之功能。
2、仪器应放在干燥的房间内，使用时放置在坚固平稳的工作台上，室内照明不宜太强。热天时不能用电扇直接向仪器吹风，防止灯泡灯丝发亮不稳定。
3、在未按通电源之前，应该对仪器的安全性能进行检查，电源接线应牢固，通电也要良好，各个调节旋钮的起始位置应该正确，然后再按通电源开关。在仪器尚未接通电源时，电表指针必须于“0”刻线上，不是这种情况可以用电表上的校正螺丝进行调节。
4、若大幅度改变测试波长，需稍等片刻，等灯热平衡后，重新校正“0”和“100”点，然后再测量。
5、比色皿使用完毕后，立即用蒸馏水冲洗干净，并用干净柔软的纱布将水迹擦去，以防止表面光洁度被破坏，影响比色皿的透光率。
