特殊石蜡切片中性脂质尼罗红直接染色试剂盒产品说明书
主要用途
特殊石蜡切片中性脂质尼罗红直接染色试剂是一种旨在使用特殊脱蜡处理和高度脂溶性恶嗪类荧光染料尼罗红染色技术，特异性地使组织细胞内中性脂质显示金黄色荧光，分析石蜡包埋组织切片中（保留）的中性甘油三脂、脂质以及脂蛋白等脂质状况的而经典的技术方法。该技术经过精心改良传统方法、成功实验证明的。主要适用于各种人体和动物组织石蜡切片的脂质检测。用于成脂细胞定性、细胞病理学分析（脂质细胞瘤；LIPOID）和识别（脂肪肉瘤；liposarcoma）等研究。产品即到即用，操作简捷，性能稳定，荧光清晰。
技术背景
脂类物质（LIPIDS）是一类脂溶性（疏水性）的自然分子，分为简单脂质包括脂肪酸（FATTY ACID）及其衍生物甘油一脂、二脂、三脂；复合脂质包括磷脂、糖脂、硫脂以及脂蛋白；和中性脂质包括甘油、固醇类（STEROL）物质，例如胆固醇。脂类物质在机体中具有能量储存的作用，是膜结构的组成成分和细胞信号分子。细胞浆脂滴（lipid droplet）的形成是正常细胞生理过程。脂滴由中性脂质构成，通常为甘油三酯，作为脂肪酸能量储备；或胆固醇酯（cholesteryl ester），作为过多细胞胆固醇的存储。尼罗红染色剂（9-diethylamino-5H-benzo[alpha]-phenoxazine-5-one；Nile red）是一种亲脂性的恶嗪类荧光染料。与中性脂类物质结合后，在特定激发波长480nm的激发下，显示强金黄色荧光（散发波长528nm）。 其分子式为C20H18N2O2，分子量为318。由于石蜡包埋的组织切片在去石蜡的过程中，有机溶剂诸如二甲苯等容易破坏和减少组织中的脂质成分，因此使用非二甲苯类脱蜡，以保护组织中的脂质成分是尼罗红染色的关键。
产品内容
脱蜡液（Reagent A） 50毫升
净化液（Reagent B） 10毫升
清理液（Reagent C） 50毫升
染色液（Reagent D） 100微升
稀释液（Reagent E） 10毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存染色液（Reagent D）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保证6月
用户自备
1.5毫升离心管：用于反应液配制的容器
恒温培养箱：用于组织处理孵育
荧光显微镜：用于切片染色后观察分析
实验步骤
一、 脱蜡处理
1． 取出待测的6微米厚的石蜡包埋的组织切片
2． 放进80℃烘箱，孵育30分钟
3． 室温下静置15分钟
4． 小心加上500微升脱蜡液（Reagent A）在切片上，铺满整个切片样品表面
5． 室温下孵育5分钟
6． 小心移去切片上的脱蜡液（Reagent A）
7． 重复实验步骤4至6一次
8． 小心加上200微升净化液（Reagent B）在切片上，铺满整个切片样品表面
9． 室温下孵育5分钟
10． 小心移去切片上的净化液（Reagent B）
11． 小心加上200微升清理液（Reagent C）在切片上，铺满整个切片样品表面
12． 室温下孵育3分钟
13． 小心移去切片上的清理液（Reagent C）
二、 样本染色处理
实验开始前，将试剂盒里的染色液（Reagent D）冻融，然后移出1毫升稀释液（Reagent E）到1.5毫升离心管，加入10微升染色液（Reagent D），混匀后，置入冰槽里，标记为染色工作液，避免光照。然后进行下列操作。
1． 小心加上200微升染色工作液，铺满整个切片样品表面
2． 室温下孵育10分钟，避免光照
3． 放上盖玻片
4． 即刻在荧光显微镜下观察：激发波长488nm，散发波长528nm（中性脂类物质呈现金黄色）
注意事项
1． 本产品为50次操作
2． 建议用户避免使用常规石蜡包埋组织切片，即石蜡包埋前避免二甲苯等透明处理
3． 操作时，须戴手套
4． 染色工作液新鲜配制，即刻使用，不宜保存
5． 染色液（Reagent C）的工作液使用比例：1毫升体系可以使用10微升（1：100容量比）
6． 染色时更换试剂溶液时，保持切片面基本晾干
7． 试剂溶液在切片表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满切片表面
8． 整个染色操作，在避光状态下进行
9． 染色完成后，即刻进行荧光显微镜观察
10． 本公司提供系列脂类染色试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定荧光清晰
