gibco胎牛血清热灭活操作步骤:①选用与血清瓶同规格的对照瓶一个。
②对照瓶内放入与血清等体积的水。
③温度预试。
对照瓶内插入2—3支经挑选的温度计(保证测试温度的准确性),放入水浴箱中,接通电源,调节温度控制钮,使水浴箱温度所示温度保持在56℃。
④血清灭活。
血清瓶与带温度计的对照瓶一齐放入水浴箱中,待温度计所示温度上升至56时, 定时30分钟。
⑤大瓶血清灭活后,进行分装。
⑥保存。
分装后,抽样做无菌试验,-20~-70℃保存。
多数细胞培养中血清的热灭活并不是必要的。很多场合下,热灭活并不会改善细胞的生长,却降低了支持细胞生长的能力。即使在少数有促进的情况下,其促进的比率也是微不足道的。另外,血清的热灭活导致的沉淀常常被认为是微生物的污染,从而给用户和供应商都带来不必要的麻烦。所以胎牛血清不推荐热灭活。
热灭活一般是指在做免疫相关的试验中,通过加热灭活掉血清中的补体,以避免对免疫试验的影响。
在胎牛血清中,由于胎龄原因,尚未形成完整的补体系统,因此,胎牛血清不会真正干预免疫试验。故不需灭活。
并且,热灭活反而可能导致gibco胎牛血清中部分重要的生长因子的活性衰减,进而影响细胞培养效果。