注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义测定对象中各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成总抗氧化水平。在生物学、医学和药学研究 中常常检测血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液 及各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。 测定原理
在酸性环境下，物质还原 Fe3+-三吡啶三吖嗪(Fe3+-TPTZ)产生蓝色的 Fe2+-TPTZ 的能力反映 了其总抗氧化能力。
自备实验用品 可见分光光度计、恒温水浴锅、低温离心机、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制 提取液：液体 60mL×1 瓶，使用前预冷。 试剂一：液体 50mL×1 瓶，避光保存。 试剂二：液体 5mL×1 瓶，4℃避光保存。 试剂三：液体 5mL×1 瓶，避光保存。
样品的制备 (1) 血清、血浆、唾液或尿液样品 血浆（制备时可以使用肝素或柠檬酸钠抗凝，不宜使用 EDTA 抗凝）4℃，5000rpm 离心 10min，取上清待测。血清、唾液或尿液样品直接用于测定，也可以-80℃冻存（不宜超 30 d） 后再测定。
(2) 组织样品 按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 (3) 细胞样品 按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞 加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎（功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；10000g， 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
总抗氧化能力计算
1. 定义：样品的抗氧化能力以达到同样吸光度变化值（△A）所需的标准液离子浓度表示。 标准曲线为 y=0.6308 x +0.1291，R2=0.9989 2. 计算公式：
(1)按蛋白浓度计算 总抗氧化能力（U/mg prot）=1÷0.6308×（△ A-0.1291）× V 反总÷（V 样× Cpr） =53.9×（△ A-0.1291）÷ Cpr
(2)按样品质量计算 总抗氧化能力（U/g）=1÷0.6308×（△ A-0.1291）× V 反总÷（V 样÷V 样总×W） =53.9×（△ A-0.1291）÷ W (3)按细胞数量计算 总抗氧化能力（U/104 cell）=1÷0.6308×（△A-0.1291）×V 反总÷V 样×V 样总÷细 胞数量（万个）= 53.9×（△A-0.1291）÷ 细胞数量（万个） (4)按液体体积计算 总抗氧化能力（U/mL）=1÷0.6308×（△A-0.1291）× V 反总÷V 样 =53.9×（△A-0.1291）÷ Cpr V 样总：加入提取液体积，1 mL； V 反总：反应总体积，1.02mL；V 样：反应中样品体积， 0.03mL；W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL
注意事项 1. 试剂二对人体有刺激性，请采取适当的防护措施。为了您的安全和健康，请穿实验服并 戴乳胶手套操
2. 尽量避免使用在酸性条件下呈蓝色或接近蓝色的试剂，否则对本试剂盒的检测结果产生 干扰。
3. 样品中不宜添加 Tween、Triton 和 NP-40 等去垢剂和 DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反 应的还原剂。
4. 如果样品测定出来的吸光值在标准曲线范围以外，需把样品适当稀释或浓缩后再进行测 定。 5. 试剂盒 2-8℃保存。
