细胞破壁的原理:
破壁后,细胞内的水份油份迁出,使微粒子表面呈现出半湿润状态,粒子和粒子之间会形成稳定的粒子团,每个粒子团都包含相同比例的中药成分。该粒子团的物理结构随组份中各成分HLB值(亲水,亲油平衡值)、延展性、破碎性、比重等不同组合和不同的相互作用而不同,这种结构有利于人体对中药的吸收和利用。
细胞破壁的注意事项:
1、确保具备足够的初始材料,可以使用相同的试剂多次尝试,因为可能需要调整条件。这对于利用酶法制备原生质球尤为重要。
2、为了得到活的原生质体,起始物质应该处于生命的全盛时期。所以选择从幼嫩的植物组织开始,或者在生长的对数阶段积极地进行细胞培养。非常年轻的组织通常很小,他们更容易受到伤害,这增加了他们在处理中可能无法存活的几率。另一方面,老的组织不容易再生,更容易感染。
3、在进行任何处理前将细胞冷却并保持是很重要的,保持细胞低温可以减缓坏死。但保持细胞温度高于冰点也是至关重要的,因为即使是在介质中短暂形成的冰晶也会损害细胞,减少产量。
4、原生质球对机械压力和渗透压非常敏感。为了防止它们破裂,需要维持等渗条件,这意味着细胞内外的渗透压应该相等,渗透压取决于盐离子的浓度,不平等的压力会导致细胞破裂(低渗溶液)或内爆(高渗溶液)。
5、即使是细胞的年龄和酶的批次之间的细微差别,也会形成不*的细胞壁消化和过度消化之间的对比,前者原生质球产量为50%,后者导致大量死亡细胞。在大多数实验中,不需要*移除细胞壁——部分移除细胞壁的原生质球就可以了。