基于物质对200~800nm光谱区辐射的吸收特性建立起来的分析测定方法称为紫外-可见吸收光谱法或紫外-可见分光光度法。
紫外可见光分光光度计工作原理与红外光谱、拉曼光谱的工作原理近似,采用一定频率的紫外可见光照射所需检测的物质,引起物质中电子跃迁,从而表现出随着吸收波长变化而引起的光谱变化,记录光谱变化形成分析数据。
紫外可见光分光光度计可以分为以下几种:
1、单光束UV:单光源发射单光束,全程密闭,通过光栅,照射样品,最后由光电倍增管监测器检测。
缺点:测完空白再测试样品,全波段分析时间较长(一般2min)。
2、比例双光束UV:单光源单光束,全程密闭,通过光栅,加入棱镜,把光分为两束,分别照射样品与空白,再合并光,进入光电倍增管检测器,通过差减法计算结果。好处:空白样品同时检测。
缺点:灵敏度下降,全波段分析时间较长。
3、双光束UV:单光源单光束,全程密闭,通过棱镜分出两道光,分别通过一光栅,分别进入各自的光点倍增管检测器。好处:加强灵敏度,同时测量空白与样品。
缺点:全波段分析时间较长。
4、全波段UV:单光源单光束,样品与空白暴露在空气中,照射样品,开始进入密闭箱,通过光栅,进入DAD检测器。好处:空白只需要检测一次,如果你愿意一辈子检测这一次都可以。检测样品不密闭,外界光线对其无影响,使用方便且精确。分析任何波段或全波段不到1s。
缺点:价格比较贵。