原代培养是指由体内取出组织或细胞进行的首-次培养，也叫初代培养，是细胞系建立的第一步。
在9月22日开播的“原代细胞常见问题解决方案”课程中，有很多老师就原代细胞培养问题提出了疑问。我们筛选出部分代表性问题，并作了详细解答。
脐静脉内皮细胞需要包被吗？选用什么包被比较好？
脐静脉内皮细胞建议包被，建议选用0.1%明胶包被，包被的细胞形态会比不包被的好看。
角质细胞需要包被吗？
角质细胞生长类似上皮细胞，营养环境要求高，建议使用胶原蛋白包被。
细胞原皿状态很好，传代后细胞边界不清楚是什么原因？感觉虚化的很快。
传代后边界不清晰，考虑细胞是否需要外基质条件，尝试包被培养瓶；其次考虑细胞是否老化、分化。
请问真菌污染了怎么办？就丢了这瓶细胞吗？
真菌污染细胞，建议丢弃，避免对其他细胞造成交叉污染，损失更大；若要挽救，建议隔离培养，加两性-霉素B等抗生素，每天换液，持续清除，但只能维持几周，后续培养会反复爆发，耗费成本更高。
支原体污染会改变细胞的形状吗？细胞里面也有很多小碎片，这该怎么办？用抗支原体药可以去除细胞外碎片，但是细胞里的无变化。
污染较轻的，不会影响细胞状态，出现大量碎片，细胞内部也有碎片，污染就很严重了，支原体清除试剂对外部清除有效，内部较难清除；同时在细胞内部已损伤情况下，没有必要清除，此时细胞已经丧失很多功能，建议废弃。
肝细胞培养中包被对其影响大吗？
肝细胞营养环境要求较高，建议包被，不包被影响贴壁率（低于50%），长时间培养不包被会导致细胞卷曲聚团，影响状态。
原代人牙周膜细胞冻存复苏后贴壁很少且生长很慢，怎么处理呢？
原代细胞复苏贴壁少，生长慢，首先是调整细胞密度保持在70%以上，确保生长状态，其次选用高质量血清或培养基进行补救，也可以补加5%血清。
小鼠原代雪旺细胞传代后不增殖怎么办？
一般建议：
1
静置培养细胞，细胞在稳定环境下更易生长，一般3-5天可有变化；
2
调整细胞密度，控制在70%-80%，更利于细胞生长；
3
补加适量血清促进细胞增殖，或更换质量更高的血清，提高营养因子促进细胞生长。雪旺细胞分离初期1-2周是处于停止增殖状态的，度过该时期才会增殖。
原代细胞的红细胞较多怎么办？需要红细胞裂解液吗？
分离初期红细胞较多，可用淋巴细胞分离液或Percoll分离液分离，也可用裂解液处理。
原代分离肺动脉平滑肌细胞，酶消化法和贴壁法，哪个更好呢？
贴壁法细胞爬出慢，周期长，成功率不高耗费时间，得到的细胞活性相对高；消化法，速度快，数量多，刚分离的活性差一点，后期培养要适应，看自主需求选择。
干细胞传代次数有限制吗？
理论上无传代次数限制，实际培养中，受离体培养环境变化、血清质量、培养基质量、传代损伤等外部培养环境影响，细胞超过10代以上会出现分化、不增殖、老化凋亡等问题，所以常规建议10代以内使用。
我们取的骨骼肌卫星细胞，在大皿养没事，一换液就漂，是啥原因？
骨骼肌卫星细胞，本身贴壁性不强，易漂浮，特别是局部密度大会导致细胞聚集成束，最后分化形成肌管束，建议培养中均匀接种，包被增强吸附性，控制密度在70-80%。
脂肪细胞原代培养分离细胞时，没有细胞怎么办？
脂肪细胞原代培养没分出细胞，一是要检查分离方法是否正确，中间每一步操作最好进行镜检，可以找出是哪一步损失细胞的，二是考虑后面离心步骤是否损失细胞，细胞包含脂滴，密度较小，漂浮丢弃了也有可能。
