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液质联用检测头孢地尼中有关物质

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2022/10/21 10:02:16

药品杂质是反映药品质量的重要指标,人用药品注册技术要求国际协调会议(Internat ional Conference of Harmonizition ICH)要求:表观含量>0.1%的杂质应进行定性分析;常规的杂质定性分析方法通常采用分离制备杂质纯品,再进行波谱学方法解析。


近年来,越来越多的利用液质联用技术分析有关物质的含量及定性。但目前药典中很多的有关物质分析的方法,均采用非挥发性缓冲盐,甚至添加了离子对试剂作为流动相,因此不能直接进入质谱分析,给杂质定性带来了很大的挑战,导致应用出现局限性。本方法介绍了采用柱切换二维液相色谱分离-质谱定性的方法,来解决此类问题,对一维上洗脱下来的杂质等目标化合物经过阀切换至二维色谱柱,在二维色谱柱上进行除盐后,再进质谱进行定性分析,通过质谱裂解规律,寻找杂质可能产生的来源以及形成的机理,取得了较好的效果。本实验仪器连接图见图2-14

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头孢地尼,属第3代头孢,其结构见图2-13。胶囊剂:50 mg/粒,100 mg/粒,由日本藤泽药品工业公司原研,1991年日本上市,商品名Cefzon,1997年12月被美国上市,1999年在韩国上市,2001年国产头孢地尼获准在中国上市。该品用于对头孢地尼敏感的葡萄球菌属、链球菌属、肺炎球菌、消化链球菌、丙酸杆菌、淋病奈瑟氏菌、卡他莫拉菌、大肠埃希菌、克雷伯菌属、奇异变形杆菌、普鲁威登斯菌属、流感嗜血杆菌等菌株所引起的感染。


一维分析柱:Acclaim 120 C18,5 µm,4.6×150 mm,P/N:059148;二维色谱柱:Acclaim PAII,3 µm,3.0×50 mm, P/N:068973MS工作参数:1) Full Scan,ESI源,正离子模式,M/Z: 100-600;负离子模式:100-600;Scan time 0.4S。2) 子离子扫描(母离子根据full scan扫描得到):正负离子同时扫描,Full scan M/Z=100-600,Scan time 0.2s,FWHM 0.70,CE 10V,Energy Ramp: 40eV3)调谐参数:电压:2200 V;雾化温度:350℃;鞘气压力:35 psi;辅助气压力:10 psi;毛细管温度:300℃。


一维分析流动相(右泵),梯度程序见表2-9:流动相A:0.25%四甲基氢氧化铵溶液(用磷酸调节pH=5.5)1000 mL,加入0.l mol/L乙二胺四醋酸二钠溶液0.4 mL;流动相B:0.25%四甲基氢氧化铵溶液(用磷酸调节pH=5.5)-乙睛-甲醇=500-300-200,加入0.1 mo1/L乙二胺四醋酸二钠溶液0.4 mL。二维分析流动相(左泵),梯度程序见表2-10:A:0.005 mol/L醋酸铵,pH用乙酸调节至5.5;B:乙腈。阀切换时间见表2-11,测定谱图见图2-15、2-16。柱温:40℃;进样体积:20.0 µL;检测波长:254 nm。

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根据破坏样品紫外谱图,发现热破坏杂质峰更多,因此,选用热破坏样品进行杂质分析。从图可以看出,9号峰为主峰头孢地尼,其他峰为杂质峰,分别对6、7、9、10、12、15号峰等进行了阀切换,把每个峰先切到定量环里,然后再启动左泵洗脱除盐后,进质谱分析。图2-16为质谱上进样阀除盐切换时间试验图谱。从图2-16可以看出,上图为负离子模式,M-H为291.1,是EDTA盐;正离子模式下,M+H 74.1为四甲基氢氧化铵盐,因此,要把流动相中的盐去除干净,需要找到合适的质谱上的进样阀的切换时间,把这两个峰进行切除,流入废液。在本试验中,质谱进样阀的切入时间约为4.0 min(以六通阀切换进样后开始计算)。通过该方法,对每一个杂质进行单独切换后,通过定量环转移至二维色谱柱上,再采用与质谱兼容的流动相,把二维色谱柱上保留的盐份去除掉,然后把目标化合物洗脱下来,进质谱分析,该方法取得了较好的结果,解决了相关难题,最终分析结果见下表


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