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液体培养基的配置原则

浙江联硕生物科技有限公司

2022/12/9 11:53:00

根据培养目的需要选择适宜的营养物质

由于微生物营养类型复杂,不同微生物有不同的营养要求。因此,要根据不同微生物的营养需求选择适宜的营养物质,配制针对性强的培养基。

自养微生物有较强的合成能力,能以简单的无机物如co2和无机盐合成复杂的细胞物质。因此,培养自养微生物的培养基应由简单的无机物组成。

异养微生物的合成能力较弱,不能以CO2作为唯/一碳源或主要碳源,故应在培养基中至少添加一种有机物。

注意营养物质的浓度与配比要合适

微生物只有在营养物质浓度及其比例合适时才能良好生长。营养物质浓度过低不能满足现生长需要,过高又抑制其生长。例如,适量的蔗糖是异养微生物的良好碳源和能源,但高浓度蔗糖则抑制菌体生长。金属离子是微生物生长所不/可/缺/少的矿质养分,但浓度扩大,尤其是重金属离子,反而抑制其生长,甚至产生杀菌作用。

控制培养基的条件

(1) 控制培养基的pH 配制培养基必须根据微生物的特点调节pH。各大类微生物要求的适宜生长pH范围不同。如霉菌与酵母菌一般为5.0-6.0, 细菌为6.5-7.5.放线菌为7.5-8.5.培养基的pH与其C/N有极大关系。C/N高的培养基,例如培养各种真菌的培养基,经培养后其pH明显下降;相反,C/N低的培养基,例如培养一般细菌的培养基, 经培养后,其pH则明显上升。这是由于营养物质的消耗与代谢产物的积累,改变了培养基的pH,若不及时控制,将导致菌体生长停止。

(2)调节氧化还原电位(Eh) 各种微生物对培养基的Eh要求不同。适宜好氧微生物生长的Eh值一般为+0.3~+0.4V,厌氧微生物只能在+0.1V以下生长,因此,培养好氧微生物必须保证氧的供应,可在培养基中加入氧化剂提高Eh值。

(3)调节渗透压 多数微生物能耐受较大范围渗透压的变化。培养基中营养物质的浓度过大,会使渗透压过高,使细胞发生质壁分离而抑制微生物生长。低渗溶液则使细胞吸水膨胀易破裂,因此,配制培养基时要掌握营养物质的浓度。常在培养基中加人适量的Nacl以提高渗透压。

原料来源的选择力求节约

配制培养基还应遵循力求节约的原则,尽量选用价格便宜、来源方便的原料。特别是在工业发酵中,培养基用量大,更应注意利用低成本的原料,降低产品成本。

灭菌处理

为了避免杂菌污染,获得微生物纯培养物,培养基必须及时严格灭菌。通常采用高压蒸汽灭菌。一般培养基用0. IMPa (121℃)维持15 ~ 30min即可彻/底灭菌。长时间的高温灭菌会使某些不耐热的物质破坏,如使糖类物质形成氨基糖、焦糖。因此,含糖培养基常用0.05MPa (110℃) 灭菌20 ~ 30min某些对糖类要求更高的培养基,可先将糖过滤除菌或间歇灭菌,再与其他已灭菌的成分混合。长时间高温灭菌也会使磷酸盐、碳酸盐与钙、镁铁等阳离子形成难溶性化合物而产生沉淀。为了防止这类沉淀发生,可将这些物质分别灭菌,冷却后再混合;也可在培养基中加入少量整合剂(0.01%乙二胺四乙酸,即EDTA)使金属离子形成可溶性络合物,防止沉淀的产生。高压蒸汽灭菌一般使培养基 pH降低, 应在配制培养基时加以调节。


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