细菌计数
细菌细胞计数是建立或监测细菌生长速度、确定种群倍增时间所必需的。细菌培
养物可以通过测定活细胞数来确定，活细胞数是每 mL 的菌落形成单位数
(CFU/mL)，或者通过使用分光光度计测量 600 nm 处的光密度（OD600）来间接
分析细胞总数。必须指出的是，细菌的生长速度和培养要求在不同菌种之间可能
有很大的差异，因此很难用同一种方式量化所有的细菌。下面，科博瑞 提供了一
个关于如何确定细菌细胞计数的一般程序。
活体计数：
为了计数细菌悬浮液中的 CFU，从活跃的细菌液体培养物中吸取一定的体积在
适当的液体介质中稀释。稀释的程度将取决于菌株的生长速度和阶段。为了准确
测定活细胞数，应准备一系列稀释液和相应的平板。要确定稀释度，请使用以下
公式：
例如，如果 1.0mL 的原菌液与 9.0mL 的稀释剂混合，稀释度是 1/(1+9)或 1/10。
这是 1 到 10 的稀释度，因为一个体积被稀释到总共 10 个体积。稀释度也可以写
成 1：10，或按指数写成 10 -1。
在制备稀释系列之后，每个稀释液使用涂布平板技术无菌地涂布到几个平板上，
然后在最佳条件下生长。必须注意的是，培养物的体积也应该被考虑到最终计算
的稀释度中。例如，如果涂布量为 0.1mL，则被视为 1：10 的稀释度。这是因为
最终的细胞计数是以每 mL 的 CFU 数来计算的，而 0.1mL 是十分之一毫升。
注意：这个 0.1mL 是 科博瑞实验室平板计数实验常用的体积，用的是提前准备
好的平板，不需要给培养基水浴保温，可以节约操作时间。食品或环境监测请按
照国标里面的体积要求计数
经过一段合适的生长期后，每个平板上生长的菌落数量可以被计数。为了获得zui
hao的结果，只能使用菌落数在 30-300 之间的平板，因为这将提供细菌浓度的准
确表示。要确定 CFU/mL，请使用以下公式：
稀释倍数
CFU/mL 平均菌落数
具体来说，计算一个稀释系列的菌落数量的平均值，然后除以平板上的最终稀释
度。例如，如果在稀释度为 10 -7时（试管 10 倍系列稀释到 10 -6，取 0.1mL 涂布
平板计数），从一组平板中获得三种计数：40、37 和 43，细菌滴度将为
4.0x10 8CFU/mL。
实验材料
1 细菌的液体培养物
2 移液枪
3 酒精灯
4 系列稀释液
5 涂布棒
6 固体平板
7 酒精棉球
8 旋涡混匀器
操作步骤
1 如上图所示给稀释管和琼脂平板贴上标签（标签很重要，不然容易混淆）。
2 通过小心地旋转混合物来轻轻地混合培养物悬浮液
3 无菌取出 1.0mL 培养物并将其移入 9mL 的 10-1 稀释液空白中。旋涡混匀器混
匀，混合 10-1的稀释液。
4 换用新的无菌枪头，从 10-1稀释中取出 1.0mL，转移到 9mL 的 10-2稀释管中。
旋涡混匀器混匀。
5 在每根试管子之间使用新的枪头，继续连续稀释到 10-6（也可以根据需要继续
稀释）。
6 做完后稀释系列，回到 10-2稀释管中。轻轻地旋转样品。然后用新枪头，将 0.1mL
转移到琼脂培养皿中，进行平板涂布，做 2-3 个重复。将涂布后的平板放置在适
宜的培养环境中。
7 继续吸取后续的稀释系列涂布。在适当的温度和生长周期下，将每一盘琼脂倒
置培养。
9 选择有 30-300 个菌落的培养皿，数一数培养皿上的菌落数。
10 使用菌落计数公式来确定活细胞计数。
注意
这个文档整理的方法可以较准确且便捷地测定特定条件下培养物的活菌浓度，无
法计数培养物中的死菌浓度，同时也不能直接等同基因的拷贝数。实验室常规的
定量操作可以参考本文档，国标食品或环境检测请按照标准执行。
