苯基色谱柱是苯基通过碳链连接键合于硅胶基质上。连接的碳链以3个C较常见，还有一些采用4个或者更多的碳链来键合。4个或者更多的碳链连接在某种程度上可以使苯环与被分析芳香化合物苯环能够更好地接触。
苯基键合相由于碳链的存在，所以具有一定的疏水保留能力，而苯环的存在又为芳香化合物提供了较佳的选择性。
因为苯环可以与芳香化合物之间形成π-π相互作用，从而提供了与C18不同的选择性。而对于苯环上含有吸电子基团的化合物，苯基柱的保留很强。
苯基色谱柱的使用：
苯基相为π-碱性（给电子），与烷基相和EPG相的总保留时间相似，便于色谱柱筛选。苯基相的交替选择性通常由通过苯环可得到的π-π相互作用来解释。对苯基相表现出差异选择性的化合物包括：
1、疏水碱（TCAs、四环素类）；
2、中度碱（麻醉剂和麻醉性镇痛药）；
3、苯二氮卓类；
4、一些酸性化合物如ACE抑制剂和喹啉类抗生素；
5、核苷（例如胞苷)；
6、硝基、叠氮化物和磺酰基化合物。
苯基色谱柱的选择性与C18（ODS）相反。分析碱性药物时，苯基色谱柱得到的峰形良好。广泛用于酸、碱和中性样品的分析，对于酸和碱可得到相似的结果，且峰形均很好。
