主要用途
植物氧化应激活性氧（ROS）鲁米诺化学发光法定量检测试剂是一种旨在通过自由基探针鲁米诺和强化剂的参与下，植物样品中的活性氧族使发光物氧化降解并发光，在化学发光仪（Luminometer）的帮助下定量检测样品中活性氧族（过氧化氢）的生成和数量的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种新鲜的植物组织（叶片、谷粒、种子等）等的活性氧族的检测。可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老和代谢等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简易，性能稳定，检测敏感。
产品内容
清理液（Reagent A） 220毫升
强化液（Reagent B） 1毫升
发光液（Reagent C） 1毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存强化液（Reagent B）和发光液（Reagent C）在－20℃冰箱里，严格避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保证6月
用户自备
15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
1.5毫升离心管：用于样品操作的容器
微型台式离心机：用于去除样品杂质
DOUNCE匀浆器：用于裂解植物组织样品
超声仪：用于裂解植物组织样品
测试管或黑色96孔板：用于发光检测用的容器
化学发光仪：用于检测化学发光
实验步骤
一、 样品预处理
1． 准备好新鲜的植物组织（叶片、谷粒、种子等），并秤重以确定500毫克组织重量
2． （选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管
3． （选择步骤）加入3毫升清理液（Reagent A）清洗1次
4． 即刻用刀片切碎组织
5． 放进一个预冷的15毫升锥形离心管
6． 加入预冷的1毫升清理液（Reagent A）
7． 涡旋震荡5秒，充分混匀
8． 即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器，在冰槽里用研磨棒匀化组织（约80下）
9． 将所有组织匀浆物移入1.5毫升离心管
10． 强力涡旋震荡5秒，充分混匀
11． （选择步骤）在冰槽里，置于200瓦超声仪下，功率50％，猝击5秒
12． 放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为5000g（或7500RPM，例如eppendorf 5415）
13． 小心移出上清液（注意：不要触碰沉淀物）到另一个新的预冷的1.5毫升离心管
14． （选择步骤）如果上清液含有肉眼可见的残渣，重复离心5分钟一次，速度为5000g（或7500RPM，例如eppendorf 5415）
15． （选择步骤）移取5微升进行蛋白定量测定，并调整蛋白浓度为20毫克/毫升（注意：建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－GMS30030.1）
16． 置于冰槽里继续后续操作（1小时内）
二、 测读
测读开始前，打开化学发光仪，设定仪器内温度为37℃预热和整合测读1秒；然后关掉实验室的灯光。将－20℃冰箱里的试剂置入冰槽里融化，严格置于暗室里。然后进行下列操作。
1． 准备好测试管，做好标记：阴性对照、样品本底和样品活性
2． 移取400微升清理液（Reagent A）到阴性对照测试管
3． 移取400微升上述预处理的待测样品到样品本底测试管
4． 移取400微升上述预处理的待测样品到样品活性测试管
5． 分别加入10微升强化液（Reagent B）到上述测试管，除样品本底测试管外
6． 分别加入10微升发光液（Reagent C）到上述测试管，除样品本底测试管外
7． 轻轻涡旋混匀
8． 即刻放进37℃化学发光仪里测读（注意：建议瞬时测读或30秒内测读）
9． 整合测读1秒，获得相对发光单位（relative light unit；RLU）
10． 或者测读光电子读数：X 106 CPM（counted photon per minute）（注意：可以使用液体闪烁仪替代）
11． 计算ROS水平：
【（样品活性－样品本底）—阴性对照】 ÷ 0.4（毫升；样品容量） ＝相对发光单位（RLU） / 毫升＝相对发光单位（RLU）/20毫克＝X 106 CPM/毫升＝X 106 CPM/20毫克
注意事项
1． 本产品为50次操作
2． 操作时，须戴手套
3． 测试前，样品须新鲜收集，1小时内为最佳
4． 样品制备后即刻测读，不宜过夜保存
5． 必要时，例如活性氧族过低，可以浓缩样品处理
6． 如果测定体系变化，则试剂用量相应变化
7． 系统操作过程中，阴性对照只需测定一次
8． 测读的所有步骤均须在暗室里进行
9． 如果是注射式化学发光仪，建议测试前后使用无离子水冲洗化学发光仪注射（injector）管道
10． 本公司提供系列活性氧分析试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定检测敏感
