硝酸纤维素膜（NC膜）吸附蛋白的重要性、影响因素常问题处理

硝酸纤维素膜(nitrocellulose filter membrane，简称NC膜)，在胶体金试纸中用做C/T线的承载体，同时也是免疫反应的发生处。

蛋白质吸附的重要性
在免疫层析检测中，蛋白质固着于NC膜作为待测样本的捕获试剂。由于检测结果取决于捕获试剂在膜上达到良好的吸附效果，因此蛋白质在膜上均一、良好的吸附对检测结果非常重要。

自从NC膜第一次应用于蛋白质吸附以来，已有相当多的关于蛋白质吸附于NC膜的研究，但蛋白质吸附于NC膜的确切作用机理仍然不能确定。虽然多种作用力在结合中起到作用，尤其比如疏水力、氢键、静电作用，但是每种作用力的重要性和明确的效果仍然让人难以琢磨。目前有两种比较合理的作用模式。第一种模式认为，蛋白质最初通过静电作用被吸附到NC膜表面，而长期的结合作用是通过氢键和疏水作用完成的。虽然这一原理难以证明，但与已发表的文献实验结论一致，也是尤为接受的作用机理。

第二种模式认为，蛋白质首先通过疏水相互作用结合到NC膜上，通过静电力牢固地与NC膜结合则。该结合模式同大量已发表的文献结果一致，然而静电作用机理对于采用干燥或乙醇吸附方法到达的蛋白质长期稳定的吸附于NC膜上无法提高合理的解释。

不管蛋白质结合的作用力如何达到平衡，研究人员在优化蛋白质吸附于特定的NC膜时，必须综合考虑所有影响蛋白质吸附的作用力。这一观点不可避免的影响着试纸条板材的选择及其处理工艺。例如，如果产品开发人员选用可以极度降低静电相互作用或者疏水相互作用的缓冲液，那么蛋白质的吸附能力则剧烈的降低。同理，蛋白质点膜后充足地干燥对于确保蛋白质长期稳定地固着于NC膜非常重要。

生产商选用的材料能够有效地将蛋白吸附于NC膜上。影响蛋白质吸附于NC膜的材料通常有3种类型：非特异性的蛋白质、影响静电相互作用以及疏水相互作用的物质。常见的能够降低蛋白质结合的物质包括竞争蛋白质结合位点的其他蛋白，如BSA、动物血清，干扰氢键的形成物质（如甲酰胺、尿素），影响疏水作用形成的物质（如Tween、Triton、Brij）。人工合成的结合物比如聚乙/烯醇、聚乙二醇以及聚乙/烯吡/咯烷酮也可以影响蛋白质的结合，它们的作用机理可能是抑制一个或者多个蛋白质与NC膜结合的共同作用的结果。

如果NC膜上结合的蛋白量不足或者蛋白结合力不够强，就会出现相当多的问题，在检测结果的检测线上非常明显（。如果膜上结合的蛋白量太低，那么在结果中检测线显色较弱而且检测灵敏度降低。如果蛋白不能牢固的吸附于NC膜，那么在蛋白吸附于NC膜以前发生扩散，从而导致检测线较宽、显色较弱而不是鲜艳而清晰，使检测结果难以解释。在条件下，如果蛋白与NC膜的物理吸附作用太弱，流过的蛋白检测物和表面活性剂溶液可能将固着的蛋白从NC膜上洗掉，从而显示较宽或者根本不清晰的检测线，难以解释检测结果。

体外诊断试剂研发人员经常遇到上述问题，而且这些问题明显地延长了免疫层析检测试剂的研发周期。为了了解如何解决上述问题，研究人员首先应该牢固的掌握影响蛋白与NC膜结合的各种因素，包括材料的固有属性及其检测前的处理过程。

影响蛋白质吸附的因素
当研究蛋白质捕获剂结合于NC膜时，研发人员应该考虑下面五个影响蛋白质结合作用机理的每一个关键因素。
Ø 溶解捕获蛋白的工作缓冲液；
Ø 用来固着捕获蛋白的NC膜；
Ø 捕获蛋白自身；
Ø 将捕获蛋白点样于NC膜的系统；
Ø 捕获蛋白点样时的环境湿度。