谷胱甘肽的检测手段

谷胱甘肽检测方法较多，比较常用的有碘量法、DTNB（Ellman试剂）法、亚硝基铁氰化钠法、荧光法、四氧嘧啶法和高效液相色谱法（ HPLC）。上述方法各有优点，在检测GSH含量时可根据实际情况，选择适合、灵敏、精确的检测方法。

DTNB比色法

原理：DTNB与谷胱甘肽的巯基反应生成黄色的5 - 硫代 - 2 - 硝基苯甲酸，在412 nm波长处有最大吸收峰，而DTNB在400nm以上几乎没有吸收峰。向含有谷胱甘肽的试样中加入少量的DTNB，将反应液在412 nm处测定吸收值，根据吸收值的大小即可求得谷胱甘肽含量。

方法步骤：

1、DTNB贮存液配制：将0.01 mol/L的DTNB溶解于0.05 mol/L的磷酸缓冲液（pH7.0）中形成DTNB贮存液。

2、DTNB分析液配制：将DTNB贮存液用0.5 mol/L、pH8.0的Tris - HCl缓冲液稀释100倍，配成DTNB分析液，避光放置，现配现用。

3、操作步骤：取谷胱甘肽标准品溶液或待测样品溶液（0.1 ~ 3.0 mol/L）0.5 mL，加入到1.5 mL浓度为0.15 mol/L的NaOH溶液中，再加入3%的甲醛溶液05mL，在pH8.0、25℃下反应2 min，反应结束后，取反应液0.5 mL加入DTNB分析液，在25℃下反应5 min，于波长412 nm下测定吸收值。根据两者的吸光度，计算差值，代入标准曲线，计算出谷胱甘肽的含量。

碘量分析法

原理：利用谷胱甘肽的还原性与碘酸钾进行反应，当谷胱甘肽wanquan反应时，碘酸钾将碘化钾氧化为碘，碘使淀粉指示剂变成蓝色，即为滴定终点。

操作步骤：精确称取谷胱甘肽样品0.05 mg，放入10 mL烧杯，用2%的HPO3溶解，移入100 mL容量瓶，用水定容至100 mL。吸取上述溶液5 mL放入100 mL 三角瓶内，再加入2% HPO3液5 mL使之成为10 mL，然后向其中加入5%碘化钾1 mL及淀粉指示剂2滴。采用0.001 mol/L的碘酸钾滴定，以消耗0.001 mol/L碘酸钾的数值与理论值2.445 mL一致时，则成品中谷胱甘肽含量为100%。

计算公式中，V-消耗0.001 mol/L碘酸钾的体积（mL），2.445 -100%含量应消耗的体积（mL）。

高效液相色谱法

原理：高效液相色谱法是由于溶质在同定相和流动相之间的分配系数、亲和力、分子大小、吸附能力等不同，而进行连续分离的过程。

操作步骤：

①色谱条件

色谱柱：Kromasil C18柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm）。

流动相：磷酸二氢钠和辛烷磺酸钠混合溶液（磷酸二氢钠3.0 g、辛烷磺酸钠1.0 g，加水溶解并定容至500 mL，用磷酸调溶液pH为3）：乙腈 = 96：4（体积比）。

检测波长：210 nm，流速0.8 mL/min，柱温30℃，进样量10UL。

②制作标准溶液

准确称取谷胱甘肽标准品适量，用去离子水溶解于容量瓶中，混合均匀，定容，制成25 μg/mL、50 μg/mL、100 Vg/mL、200 μg/mL、400 μg/mL、800 μg/mL系列浓度样品液，作为标准溶液。

③样品制备

准确称取谷胱甘肽样品，加去离子水，混合均匀，制成浓度为25 ~ 800 μg/mL的样品溶液，作为分析溶液。

④绘制标准曲线

将配置的谷胱甘肽标准液，分别吸取10 μL进样测定，以谷胱甘肽谷胱甘肽生产技术浓度和峰面积绘制其标准曲线，根据标准曲线得出该曲线的回归方程。峰面积的变化应与谷胱甘肽的质量浓度呈线性关系，其拟合度应达0.9995以上。

⑤样品的测定

取谷胱甘肽样品分析液10 μL，用高效液相色谱仪进样测定，得到样品溶液的峰面积，根据回归方程计算出谷胱甘肽的含量。