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产碱普罗威登斯菌的培养方法与活化步骤！

一、菌种简介

平台编号：bio-67866

规格：冻干物

拉丁属名：Providencia alcalifaciens

菌株名称：产碱普罗威登斯菌

其它编号：ATCC 51902

培养基编号：121

培养温度：37℃

用途：质量控制菌株

培养基信息

培养基编号：121

名称：Tryptic Soy Agar  

备注：胰蛋白栋 17 g 大豆蛋白栋 3 g 葡萄糖 2.5 g NaCl 5.0 g K2HPO4 2.5 g 琼脂 15 g pH 7.3 +/- 0.2.

用途：质量控制菌株

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用。

二、产碱普罗威登斯菌 收货须知：收货当天发现异常，请在 24 小时内及时联系客服，逾期视为收货良好；干粉一次用完不得留存，活化 1~2 代后恢复活力即可使用，斜面、菌液使用详见附页。请严格按照本说明进行活化，否则造成菌种异常、失活等情形，不予提供补发服务。

三、产碱普罗威登斯菌 培养条件：30℃，好氧，营养琼脂培养基，24-48h。营养琼脂培养基：牛肉膏 3.0g，蛋白胨 10.0g，NaCl 5.0g，琼脂 20.0g(液体培养基不含)，蒸馏水 1.0L，pH 7.0。121℃，15min 灭菌。[注] 培养芽孢杆菌时加入 5mgMnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。

四、产碱普罗威登斯菌 活化步骤

①准备 1 支含有 5~10mL 液体培养基的试管和 2 个平板；

②安全柜中打开，用酒精灯灼烧顶部，后迅速滴上无菌水使之破裂， 随后用镊子将其敲碎；

③吸取 0.5mL 液体培养基打入冻干管， 充分溶解后重新打回液体试管中，混匀；

④吸取 0.2mL 菌悬液打入平板中，涂布均匀，重复两次获得两个平板；

⑤将液体试管和平板全部置于上述培养条件下培养，菌种长出即可使用。

五、产碱普罗威登斯菌 培养方法

1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。

2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。

3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备 菌种制备。

4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。

5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。

6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。

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