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2023/2/24 9:59:19l 血清
血清是生长和附着因子、矿物质、脂质和激素的来源,是细胞培养的重要组分。血清能调节细胞膜的通透性,同时能作为载体携带酶、脂质、酶和微量元素等进入细胞。
l 血清使用的常见问题
Q1. 收到的血清有部分解冻的现象,影响后续使用吗?
正常情况下,血清应冷冻送达。但是如果血清有部分解冻,仍可继续使用。血清在解冻后,根据实验需求分装成单次用量后再进行储存以供后续使用。
Q2. 血清需要避光保存吗?
正常情况下,在室内或实验室灯光的照明下,不影响血清的使用。但不建议将血清暴露在波长短或强度高的光下,因为血清中含有一些对光敏感的成分。
Q3. 血清必须热灭活吗?
热灭活可以破坏血清中补体的活性。哺乳动物血清中存在的补体蛋白参与细胞的溶解,收缩平滑肌,刺激细胞和血小板释放组胺,并激活淋巴细胞和巨噬细胞。有研究比较了正常热灭活胎牛血清对各种细胞株的生长能力影响(如下图所示),发现11株细胞中,热灭活对6株细胞有负面影响(红框)、3株无影响(绿框)、2株有微弱正面改善(黄框),因此在多数细胞培养中血清不需要热灭活,热灭活对细胞生长没有明显的促进作用,反而还会影响血清质量,使细胞的生长速率降低。因此如果不是非必须,可不必做血清热灭活这一处理。
图1 使用未灭活或灭活血清的细胞生长状况
Q4. 培养哪些细胞需要热灭活血清?
培养胚胎干细胞(ESC)、平滑肌细胞、免疫细胞和昆虫细胞时,建议使用热灭活血清。
Q5. 血清如何热灭活?
有研究表明,热灭活时若水浴温度过高或加热时间过长,都会降低血清的性能,从而影响细胞生长(如下图2和3所示)。因此建议将血清加热至56 °C,持续30分钟进行热灭活。
图2 使用不同温度热灭活血清对细胞生长的影响
图3 使用不同时间热灭活血清对细胞生长的影响
注意:灭活时,若使用水浴槽,请保持水面与血清液面等高。灭活后,建议使用冷水浴降温。
Q6. 什么是γ-辐照血清?
γ-辐照是将血清暴露于25-35 kGy剂量的钴-60源,使病毒和支原体等其他微生物菌体失活。γ-辐照不会降低血清的理化特性或细胞培养性能。
Q7. FBS的颜色与之前的批次不一样。这会影响血清性能吗?
血清中含有微量的血红蛋白,血清的颜色取决于血红蛋白浓度,颜色的深浅和血清的性能无关。