红细胞膜是由磷脂、胆固醇、蛋白质等组成的双层膜结构。在红细胞裂解液中,主要包含了阴离子表面活性剂(如十二烷基磺酸钠)和渗透压调节物(如葡萄糖),这些物质可以分解红细胞膜,使红细胞释放出血红蛋白。作用机制主要有以下几种:渗透裂解,通过改变细胞内外环境的渗透压差,使细胞溶解;离子置换,与细胞内离子互相置换,从而使细胞发生溶解;肌动蛋白降解,针对肌动蛋白进行降解,从而实现红细胞的裂解。
红细胞裂解液的应用:
(1)蛋白质提取
可用于体积小,难以直接提取的组织和细胞类型中的蛋白质提取。同时水解的SDS还能够增加样品的可读性。
(2)红细胞计数
血液学领域中,被广泛应用于红细胞计数和血液分类。将血液样品经过裂解后,可使红细胞溶解,方便计数并分析。
(3)其他应用
除此之外,还用于单核细胞分离、细胞周期分析、人工光合成等方面的研究。
实验室通常采用十二烷基磺酸钠(SDS)或三辛基氧化铝(TOPO)等表面活性剂与葡萄糖混合作为裂解液。将10g/l的SDS加入到20mM/L的Tris-HCl缓冲液中,并在4℃条件下混合过夜;加入可溶性的葡萄糖达到4%(w/v)的浓度悬浊液制备完成。红细胞裂解液应存放于4℃冰箱中,避免阳光直射,因为温度过高可能会分解该液体中的葡萄糖,导致失效。此外,裂解液也需注意避免污染,建议使用滤器或灭菌装置来净化。一般情况下,储存期限不超过12个月。