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抗体的制备方法及原理有哪些？分两个层面为大家一一介绍：

    一、抗血清的制备

    有了质量好的抗原，还必须选择适当的免疫途径，才能产生质量好（特异性强和效价高）的抗体。

    （一）用于免疫的动物

    作免疫用的动物有哺乳类和禽类，主要为羊、马、家兔、猴、猪、豚鼠、鸡等，实验室常用者为家兔、山羊和豚鼠等。动物种类的选择主要根据抗原的生物学特性和所要获得抗血清数目，如一般制备抗r-免疫球蛋白抗血清，多用家兔和山羊，因动物反应良好，而且能够提供足足数目的血清，用于免疫的动物应适龄，健壮，无感染性疾患，为///雄性，此外还需十分留意动物的饲养，以消除动物的个体差异以及在免疫过程中死亡的影响。若用兔，用纯种新西兰兔，一组三只，兔的体重以2～3kg为宜。

    （二）免疫途径

    免疫途径有多种多样，如静脉内、腹腔内、肌肉内、皮内、皮下、淋巴结内注射等，一般常用皮下或背部多点皮内注射，每点注射0.1ml左右。途径的选择决定于抗原的生物学特性和理化特性，如激素、酶、毒素等生物学活性抗原，一般不宜采用静脉注射。

    （三）佐剂

    由于不同个体对同一抗原的反应性不同，而且不同抗原产生免疫反应的能力也有强有弱，因此经常在注射抗原的同时，加进能增强抗原的抗原性物质，以刺激机体产生较强的免疫反应，这种物质称为免疫佐剂。

    佐剂除了延长抗原在体内的存留时间，增加抗原刺激作用外，更主要的是，它能刺激网状内皮系统，使参与免疫反应的免疫活性细胞增多，促进T细胞与B细胞的相互作用，从而增强机体对抗原的细胞免疫和抗体的产生。

    常用的佐剂是福氏佐剂（Freundadjuvant）,其成分通常是羊毛脂1份、石腊油5份，羊毛脂与石腊油的比例，视需要可调整为1：2～9（V/V），这是不全福氏佐剂，在每毫升不全佐剂加进1～20mg卡介苗就成为佐剂。

    （四）免疫方法

    抗原剂量，首剂量为300～500μg，加强免疫的剂量约为首剂量为1/4左右。每2～3周加强免疫一次。加强免疫时用不全佐剂，免疫时皮下注射百日咳疫苗0.5ml，加强免疫时不必注射百日咳疫苗。

    在第2次加强免疫后2周，从耳缘静脉取2～3ml血，制备血清，检测抗体效价（见后）。如未达到预期效价，需再进行加强免疫，直到满足时为止（图2-3）。当抗体效价达到预期水平时，即可放血制备抗血清。

    （五）抗血清的采集与保存

    家兔是常用以产生抗体的动物，因此这里主要讨论兔血的收集。羊等较大动物以颈静脉、动脉取血，鼠等小动物取血可参阅有关资料。取兔血有两种方法，一是耳缘静脉或耳动脉放血，一是颈动脉进血，也可心脏采血。取动脉或静脉放血时，将兔放进一个特造的木匣或笼内，耳露于箱（笼）外，也可由另一人捉住兔身。剪往耳缘的毛，用少许二甲苯涂抹耳廓，30s后，耳血管扩张、充血。用手轻拉耳尖，以单面剃须刀或尖的手术刀片，快速切开动脉或静脉，血液即流出，每次可收集30～40ml。然后用棉球压迫止血，凝血后洗往二甲苯。二星期后，可在另一耳放血。此法可反复多次放血。颈动脉放血时，将兔仰卧，固定于兔台，剪往颈部的毛，切开皮肤，暴露颈动脉，插管，放血。放血过程中要严格按无菌要求进行。

    收集的血液置于室温下1h左右，凝固后，置4℃下，过夜（切勿冰冻）析出血清，离心，4000rpm,10min。在无菌条件，吸出血清，分装（0.05～0.2ml），贮于-40℃以下冰箱，或冻干后贮存于4。C冰箱保存。

    （六）抗血清质量的评价

    在免疫期间，不仅各个不同的动物，而且同一动物在不同的时间内抗血清效价、特异性、亲协力等都可能发生变化，因而必须经常地采血测试。只有在对抗血清的效价、特异性、亲协力等方面作的评价后，才可使用所取得的抗血清。

    （七）免疫失败的可能原因及应采取的措施

    有时不能获得满足的抗血清，可从下列几方面找原因，并改进之。

    （1）免疫动物的种属及品系是否合适，可考虑改变动物的种属或品系，或扩大免疫动物的数目。

    （2）抗原质量是否良好，可改用其它厂家的产品或改用同一厂家的其它批号，也可考虑改变抗原分子的部分结构，或改进提取方法。

    （3）制备的免疫原是否符合要求，可从偶联剂，载体、抗原或载体的比例、反应时间等多方面往考虑，并加以改进。

    （4）所用的佐剂是否合适，乳化，可改用其它佐剂，或加强乳化。

    （5）免疫的方法、剂量，加强免疫的间隔时间和次数，免疫的途径是否合适。

    （6）动物的饲养是否得当，如营养（饲料、饮水）、环境卫生（透风、采光、温度）是否符合要求，动物的健康情况是否良好等。

    二、单克隆抗体的制备

    1975年Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞与和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交瘤细胞既可产生抗体，又可无性繁殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破使血清学的研究进进了一个高度精确的新纪元。

免疫细胞化学的技术关键之一是制备特异性强、亲协力大、滴度高的特异性抗体，由于每种抗原都有几个抗原决定簇，用它免疫动物将产生对各个决定簇的抗体，即多克隆抗体。单克隆抗体则是由一个产生抗体的细胞与一个骨髓瘤细胞融合而形成的杂交廇细胞经无性繁殖而来的细胞群所产生的，所以它的免疫球蛋白属同一类型，质地纯一，而且它是针对某一抗原决定簇的，因此特异性强，亲合性也一致。

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