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对流免疫电泳实验的操作步骤

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2023/4/11 13:48:40

1.琼脂平板的制备可以根据需要选择大玻璃平板和小玻璃载玻片。大玻璃板需要约10毫升的琼脂,小玻璃片需要约3.5毫升。固化后打孔。该方法与琼脂扩散实验相同。
2.添加样品:在左孔中添加患者血清(原始血清和10倍稀释血清各占据一个孔),在右侧添加抗血清,每片均应有阳性对照。
3.电泳操作流程:在电泳槽高度的三分之二处添加0.05mPH8.6Barbita酸盐缓冲液。请注意,两个水箱中的液位尽可能高。将带有样品的玻璃板放在电泳槽上,将抗原端连接到负极,将抗体端连接到正极过滤纸浸湿后作为盐桥,过滤纸与琼脂板连接,其长度为0.5厘米。以板宽度计算电流,以板的长度计算电压。要求电流量为2毫安/厘米,即大板为20毫安,小板为10毫安。电压为5伏/厘米。通电2小时后观察结果。
4.对流免疫电泳实验结果观察:在黑色背景上方,用多个角度的散射光观察。两口井之间有一条白色的沉淀线,这意味着阳性对照应该有一条清晰的白色沉淀线。如果是抗原,则两极微沉淀条不清楚,将其在37°C下放置数小时可增强沉淀条的清晰度。


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