操作步骤
1
准备好所有需要的试剂及工作浓度的标准品。
2
分别设定标准孔、0孔和样本孔，计算好当次试验所需要的板条数量，将不需要的板条拆卸下来，用新的封板膜重新封好，放回装有干燥剂的铝箔袋。
3
加标准品：标准品孔加入50 μL的2倍倍比稀释的标准品。0孔加入50 μL标准品/样本稀释液。
4
加样本：样本孔加入50 μL的待测样本。
5
加生物素化检测抗体：立即每孔加入50 μL生物素化抗体工作液至反应孔中。保证步骤3、4、5连续加样，不要间断。加样过程在10 min内完成。
6
孵育：使用新的封板膜封板。37℃静置孵育45 min。
7
洗涤：弃掉液体，每孔加入300 μL洗液洗板，洗涤3次。每次洗板，在吸水纸上拍干。
提示：为获得理想的实验结果，必须移除干净残留液体。洗板完成之后，请立即进行下步操作，不要让微孔板干燥。
8
加酶结合物：加入100 μL酶结合物工作液至反应孔中。
9
孵育：使用新的封板膜封板。封板后于37℃静置孵育30 min。
10
洗涤：弃掉液体，每孔加入300 μL洗液洗板，洗涤5次。每次洗板，在吸水纸上拍干。为获得理想的实验结果，必须移除干净残留液体。
提示：为获得理想的实验结果，必须移除干净残留液体。洗板完成之后，请立即进行下步操作，不要让微孔板干燥。
11
加底物显色：每孔加入90 μL显色底物TMB，避光，37℃避光显色15 min。
提示：可根据实际显色情况酌情缩短或延长显色时间，但不可超过30 min。当标准孔颜色出现明显梯度时，即可终止。提前15 min打开酶标仪预热。
12
加终止液：每孔加入50 μL终止液，终止液加入的顺序应尽量与显色底物加入的顺序相同。
提示：终止液加入后微孔板内液体的颜色由蓝色变为黄色。如果颜色呈现绿色或者颜色的变化明显不均匀，请轻轻叩击板框，水平充分混匀。
13
检测读数：在5 min之内，使用酶标仪进行双波长检测，测定450 nm最大吸收波长和630 nm参考波长下的OD值。
提示：校准后的OD值为450 nm的测定值减去630 nm的测定值。（注：630 nm OD值为酶标板材质吸收值。若不能进行双波长检测，可只测定450 nm波长下的OD值，但数据的准确度会降低一些）
注意事项
检测之前请将所有的试剂、样本平衡至室温。
样本复融后若有沉淀，需再次离心，取上清检测。
试剂或样本配制时，需充分混匀并尽量避免起泡。
标曲和样本建议做复孔检测。
