多功能酶标仪的应用介绍及选型

酶标仪也被称为微孔板检测仪，是生命科学研究实验室的重要工具。

传统的酶标仪是指具备吸收光检测功能的酶联免疫检测仪，后来随着检测方式的发展，在吸收光检测基础上增加了荧光和发光检测，因此，我们把具有两种及两种以上检测功能的酶标仪称为多功能酶标仪，也叫做多功能微孔板检测仪，目前广泛应用于临床检验、生物学研究、农业科学、食品和环境科学研究中。

十年技术支持的经验来简单粗暴地谈一谈多功能酶标仪以及它能实现的功能，希望能为研究者在选择酶标仪的时候提供一定的参考。
 

多功能酶标仪的应用

多功能酶标仪通常包括紫外-可见吸收光、荧光强度及发光三种检测模式，荧光检测还包括高级荧光应用。因此一台全面的多功能酶标仪能够提供的检测模式可以包括：

1、吸收光检测（Absorbance）：
使用单色器或者滤光片系统来发射和检测特定波长，检测的是物质本身，不同的物质有不同的吸收光波长，对波长选择灵活性要求较高。
典型应用：ELISA 以及 DNA/RNA 纯度检测

2、荧光强度（Fluorescence Intensity，FI）：
采用特定波长激发光来激发样品孔内的荧光标志物，通过检测器检测荧光物质被激发产生的发生光。因为荧光分子被激发后电子会发生能量跃迁，当电子回落时产生发射光，因此发射光的波长会比激发光的波长更长（能量更低），比如常用的 GFP 的最佳激发波长是 488nm ，最佳发射光检测波长是 510nm 。

荧光强度还有一个衍生实验，那就是荧光共振能量转移（Fluorescence Resonance Energy Transfer，FRET），使用两种荧光分子分别作为供体和受体去标记两个生物分子，如果两个生物分子足够接近，那么供体荧光分子的激发能诱发受体荧光分子发出荧光信号。FRET 通常用来检测生物大分子相互作用。值得注意的是，选用的供体荧光分子发射光波长范围需要与受体荧光分子的激发光波长重叠。

3、发光检测（Luminescence）：
包括化学发光和生物发光，是样本孔内发生的化学、生化或者酶反应发出的光信号。与吸收光和荧光检测不同的是，发光检测不需要激发光源，这就使得发光更敏感，更不容易引起背景噪音。
典型应用：ATP 检测和双报告基因检测

4、发光共振能量转移（Bioluminescence Resonance Energy Transfer，BRET）：跟 FRET 类似的检测原理，不同的是供体产生生物发光来激发受体荧光分子，可以用来进行细胞内的分子互作分析。

5、时间分辨荧光（Time-resolved fluorescence ，TRF）：
是一种高级荧光检测，使用镧系金属（常用稀土元素：铕 Eu 和铽 Tb）做荧光标记，这种稀土元素的特点是：被激发后荧光寿命很长，不会马上猝灭。利用这种特性，就可以在激发后延迟检测，使得检测信号不受激发光和背景荧光的干扰，是一种极其敏感的检测方法。
这种方法常常与能量共振转移（FRET）联合使用，也就是大家熟知的 HTRF 技术（匀相时间分辨荧光），用于大分子相互作用检测，灵敏度高、特异性好。

6、荧光偏振（Fluorescence polarization，FP）：
也是一种高级荧光检测模式，需要酶标仪产生的激发光光波能够在一个方向上振荡，荧光标记在小分子上，通过竞争性结合来检测大分子和小分子相互作用，了解荧光偏振技术详细实验方案。

7、Alpha: 
AlphaScreen® 和 AlphaLISA® 是以微珠为基础的匀相发光能量转移技术。供体微珠和受体微珠可以通过各种各样的生物分子结合在一起——只要他们结合在一起，供体微珠被 680nm 光源激发后会发生一系列的化学反应产生一个放大的信号，并扩散到受体微珠，使受体微珠产生一个发射光。常用于检测大分子相互作用。AlphaPlex™ 是 AlphaScreen® 的变体,可以促进多达三种分析物的量化。

多功能酶标仪的应用概览