细胞冻存是细胞学研究中的重要内容，而细胞冻存液的配制及使用方法对于细胞冻存的成功率有着非常重要的影响。传统上，使用的是含有血清的细胞冻存液，但是血清的存在也会引发各种细胞培养难题，如批次之间的不一致性，提纯与使用难度等等。为解决这些问题，近些年来，研究者们开发了不含血清的冻存液，但是，还不同于含有血清的冻存液有很多使用上的要点需要重视。
一、无血清细胞冻存液的物质
细胞冻存液的成分和pH值是影响细胞冻存的重要因素。在无血清细胞冻存液中，3%甘油在保证细胞生存率的前提下，能够缓解细胞因冻存造成的压力。此外，DMSO、乙二醇和PEG等复合冻存液的存在，也影响细胞冻存后的生存率。因此，在配制无血清细胞冻存液的时候，需要注意成分的搭配，选择合适的成分组合以及保证pH值的合理性。
二、无血清细胞冻存液的配制
在物质的选择基础上，细胞冻存液的配制工作也非常关键。首先需要选择高质量的无菌去离子水，并将其高温消毒。在消毒的过程中需要严格控制温度和时间，以免富含矿物的水成分挥发或者水体中出现细菌。其次，将各种化学试剂按照一定比例搭配混合，调整pH值，配制成冻存液。在配制时，根据细胞的种类、生长状态以及所需要遭受的物理、化学刺激程度，考虑不同配方时需要注意控制条件的严谨性以及方案的合理性。
三、细胞的冻存方法
冻存是细胞冻存中的核心环节。在进行冻存前，需要掌握熟练的操作技巧，并在保证无菌条件的基础上，控制冻存过程的温度和时间，以确保冻存后细胞的完整和生存率。具体来说，可以依次进行以下步骤：
1.将细胞进行离心处理，去除培养基，加入冻存液混合均匀；
2.按照一定比例分装入冻存管中，密封好，放入冰箱，调低温度；
3.升级冰箱的温度，待冷却后，放入冷冻机中；
4.让样品缓慢地降温至-80℃，在-80℃的温度下，待样品逐渐进入冬眠状态；
5.将样品转入液氮罐中，保存在液氮罐内的-196℃下。
四、细胞的解冻方法
解冻是细胞冻存的另一个关键环节。良好的解冻方法是保障细胞后续生长和研究的前提。具体来说，解冻时需要遵循以下基本规则：
1.使用预先洗净的工具，为防止细菌引入；
2.以恒温水浴的方式进行解冻，温度控制在37℃；
3.解冻完成后，将细胞液匀加入到预先配置好的培养基中；
4.对细胞进行适当的温度、温度梯度和保护条件调节，进行培养。
五、无血清细胞冻存液使用的注意事项
无血清细胞冻存液使用时需要注意一些基本的操作细节，如：
1.在液氮罐中保存时间不宜过长，建议在持续不超过半年或一年的情况下使用；
2.冻存液可用于一定程序的连续冻存与解冻，但不能超过细胞耐受的极限；
3.注意无血清细胞冻存液的配方和制备成分，以及不同细胞的特殊要求；
4.合理利用冻存液的多余量，以防使用中不够。
以上就是细胞冻存前必须知道的无血清细胞冻存液使用方法。在配制、冻存、解冻以及使用过程中，需要注意的方面非常多，尤其是对于孕育具有特殊功能的细胞而言，要想保证其活性，采用无血清细胞冻存液的使用方法。除此之外，还有其他方面需要详细了解，相信在不断的实践中，我们能够更加熟练、更加高效地开展细胞冻存工作。
