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口蹄疫A型抗体检测试剂盒(酶联免疫法) 使用说明书

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2023/5/16 15:19:37

口蹄疫A型抗体检测试剂盒(酶联免疫法)

使用说明书

【产品名称】

通用名:口蹄疫A型抗体检测试剂盒(酶联免疫法)

英文名:Test Kit for Antibodies to Foot and Mouth Disease Virus A(ELISA)

【包装规格】×2/盒96T×1/盒、96T、96T×5/盒

【预期用途】 口蹄疫是由口蹄疫病毒(Foot and Mouth Disease Virus,FMDV)引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病,其特征为口腔黏膜、蹄部、乳房皮肤发生水泡和烂斑

本试剂用于检测牛、羊、猪血清中口蹄疫A型抗体,可用于口蹄疫A型疫苗免疫效果评价

【原    理】

    本试剂盒由预包被口蹄疫A型抗体的酶标板、抗体工作液、抗原液、酶标记物及其他配套试剂组成,应用阻断酶联免疫法(ELISA)原理检测牛、羊、猪血清样本中口蹄疫A型抗体。实验时将稀释的样本与抗原液同时加入酶标板中孵育,样本中的抗体与酶标板上的抗体竞争抗原,阻断抗原与板的结合;经洗涤后,再加抗体工作液孵育;经洗涤后加入酶标记物孵育;再经洗涤除去未结合的酶标记物,在孔中加底物液,与酶标结合物反应形成蓝色产物,显色深浅与样品中的特异性抗体含量成负相关;加入终止液终止反应后,产物变为黄色;用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值,即可知样品是否含有口蹄疫A型抗体。

【试剂盒组成】

序号

名称

规格/96T×1

规格/96T×2

规格/96T×5

1

酶标记物

6ml×1(红盖)

11ml×1(红盖)

26ml×1(红盖)

2

抗体工作液

6ml×1(蓝盖)

11ml×1(蓝盖)

26ml×1(蓝盖)

3

抗原液

6ml×1(黑盖)

11ml×1(黑盖)

26ml×1(黑盖)

4

20X浓缩洗涤液

40ml×1(白盖)

40ml×2(白盖)

200ml×1(白盖)

5

底物液A

6ml×1(白盖)

11ml×1(白盖)

26ml×1(白盖)

6

底物液B

6ml×1(黑盖)

11ml×1(棕盖)

26ml×1(黑盖)

7

终止液

6ml×1(黄盖)

11ml×1(黄盖)

26ml×1(黄盖)

8

阳性对照

1.0 ml×1(红盖)

1.5 ml×1(红盖)

2.0 ml×1(红盖)

9

阴性对照

1.0 ml×1(绿盖)

1.5 ml×1(绿盖)

2.0 ml×1(绿盖)

10

酶标板

96T×1

96T×2

96T×5

11

盖板膜

1

2

5

12

自封袋

1

1

2

13

说明书

1

1

1

14

稀释板

1

2

5

 

【储存及有效期】 2~8℃保存,有效期12个月。

包被板开封后请于2~8℃避光保存,避免受潮。使用期限为2个月。

【适用仪器】 450nm、630nm波长的酶标仪,37℃恒温设备,可调微量移液器。

【样品准备】

1.取动物全血按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血、无污染。样品1周内可于2~8℃保存,长期需置-20℃保存。

2.用工作洗涤液将待检牛、羊先按32倍稀释(如l血清加入155μl工作洗涤液中,混匀),待检猪血清按16倍稀释(如l血清加入75μl洗涤液中,混匀),阴、阳性对照不用稀释。

3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解,然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释成工作洗涤液(如19份蒸馏水或去离子水+1份浓缩洗涤液)。

【检验方法】

1.使用前将试剂盒置室温30分钟,恢复至室温。

2.取所需用量酶标板条,设阴性/阳性对照各2孔,未用的板条尽快密封,2~8℃保存。

3.阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照50μl,样品孔每孔先加入工作洗涤液25ul,再加入稀释后的样品25μl;最后都加入抗原液50μl。

  注:加入抗原后牛、羊样本稀释比例相当于1:128,猪样本稀释比例相当于1:64。

4.震荡混匀10秒,盖好盖板膜,置37℃(推荐水浴)避光反应30分钟。

5.甩去孔内液体,每孔加350μl工作洗涤液,静置30秒后弃去,重复洗涤5次,最后一次拍干。

6.每孔加抗体工作液50μl,盖好盖板膜,置37℃避光反应30分钟。

7.洗涤,同步骤5。

8.每孔加酶标记物50μl,盖好盖板膜,置37℃避光反应30分钟。

9.洗涤,同步骤5。

10.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混匀,盖好盖板膜,置37℃避光反应15分钟。

11.每孔加终止液50μl,混匀,于450nm(可用630nm作参比波长)测定各孔吸光值(A值)。

【参考值】 实验正常的情况下,阴性对照A值≥1.0,阳性对照A值≤阴性对照A值×50%。

【检验结果的解释】

1.PI(阻断率)=(1- 阴性对照平均A值(样本A值)×100%,PI≥50%为阳性;PI<50%为阴性。

2.本实验检测牛、羊血清结果为阳性时表明待检样本中含有口蹄疫A型抗体,且效价高于1:128,达到保护水平;反之检测结果为阴性时表明待检样本中不含有口蹄疫A型抗体,或效价低于1:128,未达到充足保护水平。

3.本实验检测猪血清结果为阳性时表明待检样本中含有口蹄疫A型抗体,且效价高于1:64,达到保护水平;反之检测结果为阴性时表明待检样本中不含有口蹄疫A型抗体,或效价低于1:64,未达到充足保护水平。

4.如需了解样本抗体的最终效价,可将样本进行梯度稀释,使PI50%的最高稀释比例即为该样本抗体的最终效价。

【试验方法的局限性】

该试验仅作为定性牛、羊、猪血清中口蹄疫A型抗体,根据PI值高低可作抗体水平强、中、弱的粗略评估。

该试剂盒不适用于合成肽疫苗免疫抗体效价评估


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