梯度冻存是一种保存生物样本的方法，通过渐进性降温来减少细胞和组织在低温下遭受的损伤。使用梯度降温冻存盒是这种方法的一种常见方式，它可以有效地保护细胞和组织，并延长其保存时间。
以下是关于使用梯度降温冻存盒的方法及注意事项。
1.选择合适的冷冻介质
在使用梯度降温冻存盒进行样品保存时，需要选择合适的冷冻介质。常用的是含有甘油、DMSO等成分的冷冻保护剂。这些化合物能够在低温下保护细胞和组织，防止其在冻结和解冻过程中受到损伤。
2.冻存盒的选择和准备
梯度降温冻存盒通常由若干个隔板组成，每个隔板中间都有一个导热介质。在使用前，需要先用液氮或其他冷却介质将整个冻存盒冷却至所需的温度。然后将待保存的样品依次装入不同的隔板中，注意每个隔板中样品的数量和浓度应相同。
3.渐进式降温
在将装有样品的冻存盒放入液氮罐或其他冷却设备后，需要进行渐进式降温。这个过程可以通过逐步提高温度来实现。具体而言，可以先将冷冻介质中样品的温度从冰点下降到-40摄氏度，然后每隔10分钟提高1摄氏度，直至达到所需的低温度。
4.注意事项
在使用梯度降温冻存盒时，还需要注意以下事项：
冻存盒中样品的数量不宜太多，以免导致温度不均匀，影响保存效果。
冷冻介质的浓度应根据样品的类型和特性来确定。一般情况下，含有10%甘油的保护剂效果较好。
冻存盒必须密封，以防止空气、水分等进入其中，影响样品的保存效果。
在保存期间，冻存盒应定期检查，确保其完整无损。如发现有破损或泄漏等情况，应及时更换或修复。
总之，使用梯度降温冻存盒是一种有效的生物样本保存方法。在使用前需要选择合适的冷冻介质、准备好冻存盒，并注意渐进式降温等步骤，以确保样品能够安全地保存并保持其生物活性。
