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2023/5/29 23:22:04RNA质控,我来帮你!
小编心里话:RNA质控是个技术活儿!
对于每天泡在实验室的人来说,qPCR已是家常便饭。毫无疑问浓度高,纯度好,片段完整,才是我们理想中的RNA样品。然而,RNA总是娇气的存在!室温或4度极易降解,提取的时候容易有污染物残留。因此完整的RNA质控包含了三个方面:浓度质控,纯度质控,片段完整性质控。
如何把控RNA质量,继续反转录呢?
有一款RNA质控的高手,既可以提供RNA浓度质控,也可以提供RNA纯度质控,没错,就是美国Denovix公司提供的DS-11FX超微量紫外/荧光全功能分光光度计,看上去酷酷的RNA纯度质控的标准方法是超微量分光光度计(光吸收)法,通过监控A260/230和A260/280的比值来判定RNA的纯度。通常A260/280的比值范围在1.8-2.0之间,如果大于2.0则说明RNA已经降解,如果低于1.8则说明含有蛋白质或其他杂质;而A260/230的比值如果小于2,则表明RNA中含有酚类,盐等杂质。DS-11FX的微量光度计功能可以帮助科研人员来准确的判定RNA样品的纯度。
下图为RNA紫外法检测示意图,A260/280和A260/230都不在正常的比值范围,说明RNA样品纯度很差,仪器会自动进行提示,两个黄色小三角就是警示图标哦,点击萌萌的黄色三角警示,仪器会显示污染物的种类,够智能吧,这就是DS-11的SmartQC功能
图1 总RNA的测量界面图(美国DeNovix,DS-11FX)
RNA浓度质控的标准方法是荧光法,除非是纯度很高的RNA也可以采用紫外法。荧光法采用RNA特异性染料,可以准确的测量RNA浓度。DS-11FX不但提供RNA浓度质控,也可以提供DNA和蛋白的浓度精确控制,功能超级强大哦。
dsDNA,RNA,ssDNA,Protein单独的荧光检测app
发表在Cell stem cell的文章PAX3 Confers Functional Heterogeneity in Skeletal Muscle Stem Cell Responses to Environmental Stress,作者提取卫星细胞的总RNA,采用DS-11FX超微量/荧光全功能分光光度计进行RT-PCR之前的RNA的质量把控和浓度鉴定。