核酸标记新贵---转染*

哈喽，艾瑞巴蒂！今天小编本着好物需要分享，来给大家介绍一款我们转染*——一步法核酸标记Lable IT。不需要构建荧光表达载体就可监测转染效率，也可进行体内体外示踪，是不是很方便。

Label IT®核酸标记试剂盒为不同核酸类型提供高效、一步到位的直接标记。采用非酶标记方法和非破坏性的方式将标记共价附着到核酸上，不会改变核酸的结构或影响下游杂交性能，下游可以直接进行体外体内示踪、生物素检测、活细胞定位等。

一、标记原理及步骤

Label IT®标记试剂包含一种反应性烷基化试剂，该试剂具有通过静电相互作用促进的强核酸结合能力。将RNA或DNA与Lable IT 在37℃混合孵育1h后纯化即可获得标记完成的核酸，即可进行下游实验。

图.Labie IT 原理及实验步骤

Label IT®化学标记试剂组成：

绿色区域：标记（荧光团或半抗原）

黄色区域：促进与核酸静电相互作用的接头

蓝色区域：反应性的烷基化基团

二、产品特点

无损标记任何DNA或RNA模板，应用广泛

图1、核酸的无损直接标记。小鼠总RNA用Label IT®Cy®3（B）电泳标记，并在Agilent RNA 6000 Nano芯片上与未标记的总RNA（A）一起分析。标记和未标记样品的RNA完整性数（RIN）约为9.0。

操作简单快速，仅需一个反应步骤

可调标记密度–通过最佳标记的DNA和RNA实现高灵敏度

图2、灵活的标记反应条件。通过调整反应中Label IT®试剂（Mirus Bio）的量或在37°C下调整标记反应的培养时间，可以轻松控制标记密度。

化学标记减少了酶标整合和复制偏好

成本低，与核酸酶法标记相比，每个反应可节省50%的费用

三、如何选择标记试剂盒

Lable IT 系列产品除了通用Lable IT核酸标记试剂盒外，还有优化的标记试剂盒：Label IT® TRACKER™，用于不同类型核酸标记。以及Lable IT®核酸修饰试剂盒，主要利用胺官能团修饰DNA或RNA。

图3、标记试剂盒种类

四、Lable IT 系列应用案例

图4、标记质粒DNA的递送及YFP报告基因表达。使用Label IT®核酸标记试剂盒CX罗丹明（Mirus Bio）标记的TransIT®-LT1（Mirus生物）和EYFP Nuc质粒DNA转染COS-7细胞的共聚焦荧光显微镜。图像显示转染罗丹明标记的质粒DNA（红色）和EYFP表达（黄色）8小时后的COS-7细胞。

图5。质粒定位和表达的间接示踪。使用TransIT®-LT1（Mirus Bio）将Label IT®Tracker -Cy®5（Mirus生物）标记的pEYFP nuc质粒（蓝色）转染进在wan全培养的COS-7细胞™中。在转染后3、8和20小时采集图像。蓝色信号表示Cy®5标记质粒的细胞定位，绿色信号表示细胞自发荧光，黄色信号表示核黄色荧光蛋白（YFP）报告子的表达。使用共焦显微镜获取图像。

图6、 C6细胞中的siRNA追踪。将C6胶质瘤细胞接种在6孔板中的聚-D-赖氨酸涂层盖玻片上并孵育过夜。将8µl TransIT -TKO®转染试剂稀释在200µl无血清培养基和50 nM（孔中的最终浓度）Label IT®siRNA Tracker CyTM3标记的siRNA双链体添加到稀释的TransIT -TKO®转染试剂中以形成复合物。随后，将这些复合物添加到wan全生长培养基中生长的45%融合的C6细胞中。转染后20小时在Zeiss LSM 510共焦显微镜上获得共焦图像。

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