一、细胞的附着和生长
在人工附着物上,大多数离体培养的脊椎动物细胞呈单层生长,因此,附着物必须带有适合细胞附着或至少适合附着因子吸附的合适电荷,附着因子可促进细胞的附着和铺展。虽然造血细胞系、啮齿动物的腹水瘤细胞和少数其他选择细胞系,如人小细胞肺癌(Carne et al.,1981)可在悬浮条件下自发生长;但许多转化细胞系也可以使它们能在悬浮条件下生长,因此,它们的生长并不依赖附着物的表面电荷。然而,大多数正常细胞增殖前,需要在附着物上铺展 ,附着不好或过度密集造成铺展不充分时,可抑制细胞增殖。需要附着才能生长的细胞被称为贴壁依赖性(achorage dependent)细胞。转化的细胞常表现出非贴壁依赖性(achorage independent),它们能在振荡培养条件下进行悬浮生长,或在半固体培养基如软琼脂上进行生长。
二、常见的细胞附着材料
一次性塑料
一次性的无菌聚丙乙烯培养瓶是简单的、易生产的培养细胞附着物。它们的透光性好、生长面平滑、质地均匀、易于生产。从制作工艺角度讲,聚丙乙烯是疏水性的,表面不适合细胞生长,因此,用于组织培养的塑料要经Y射线照射、化学处理或电离辐射,以产生亲水的带电表面。
玻璃
因其光学特性和表面电荷而成为最早使用的细胞附着物,但现在的大多数实验室里,玻璃已被合成塑料(一般为聚丙乙烯)所取代,因为合成塑料具有较大的韧性和优良的光学特性,虽然玻璃制品有便宜、易清洗、能保持支持细胞生长特性、可进行干热和湿热灭菌、透光性好等优点。只有用强碱(如NaOH或腐蚀性去污剂)处理,然后酸洗中和的玻璃才适于培养细胞 。透光性强的玻璃呈碱性,通常含铅量高而可能减慢细胞生长。因此,载玻片和盖玻片需用酸洗或涂层以达到好的效果。
三、细胞培养系统
(1)固定的单层培养物,生长在不受干扰的培养瓶、培养皿和多孔板中。这些是最容易使用的培养系统,需要的设备最少。然而,这些系统对于生产大量的细胞来说是非常耗费人力的。
(2)移动的单层培养物,主要生长在滚筒瓶中。这些容器在电动架或鼓上缓慢旋转(大约0.5rpm到1rpm),广泛用于生产大量的细胞。 滚筒瓶采用简单的技术,但需要投资于适当的设备。
(3)固定的悬浮培养物,在未经处理的培养皿和培养瓶中生长,不需要搅拌。
(4)在机械搅拌的容器(旋转瓶)、生物反应器或发酵罐中生长的移动悬浮培养物。这些系统在空间、劳动力和培养基方面是经济的; 因此,搅拌悬浮培养通常是实验室和工业界生产大量细胞的方法。许多贴壁依赖细胞可以被改造成在微载体上生长,以利用这些系统的优势。