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使用细胞分离液的注意事项

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2023/6/12 17:09:24

一、分离方法会影响胰岛的产率和存活率:

因此,取材时需要注意

1.胰脏应快速取材,保持包膜完整。

2.建议采用UW溶液运输。

3.对胰脏进行评估,在消化酶灌注前去除多余的脂肪和残留的十二指肠和脾脏。

4.消化过程不宜进行震荡,以保证胰腺组织被灌注的消化酶液消化,而不是被胰腺所释放的胰蛋白酶消化。

5.要保证胰岛的包膜完整,消化不能太充分。宁可不足,也不可过头,否则会影响胰岛纯化的产率。

 

二、分离胰岛细胞时的注意事项:

1. biocoll分离液使用时,是采用连续密度梯度,需要分别配制密度为1.065g/mL(UW溶液与Biocoll混合)和密度为1.095 g/mL(UW溶液与Biocoll混合)的溶液,二者再混合。

2. 分离时离心1800rpm,可考虑离心10分钟,之后使COBE细胞分离机保持4℃,防止酶激活导致结构完整性破坏。

3. 胰岛在最轻密度层,随着密度增加,也会有部分胰岛,但外分泌组织也会增多。


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