RNA提取实验的步骤

RNA 提取是指从样品中纯化 RNA 的过程。 RNA提取的常规方法称为硫氰酸胍-苯/酚-氯/仿提取。 Guanidinium thiocyanate 使蛋白质变性。此外，它破坏水分子的氢键并用作离液剂。 RNA 提取中使用一种特殊试剂，称为三试剂。它含有硫氰酸胍、苯/酚和乙酸钠。 RNA 提取的基本步骤的目的与 DNA 提取的目的相似。 RNA 提取的方案如下所述。

1. 用冰冷的 PBS 洗涤细胞以维持细胞的渗透压。

2. 吸出细胞并用 Tri-reagent 匀浆样品。

3. 加入氯/仿并摇匀。

4. 离心可能会出现三层。顶层是透明的水层。中间层或界面包含沉淀的 DNA。底层是有机层，呈粉红色。

5. 除去水层并加入异丙醇。离心可能会产生沉淀。

6. 用 75% 乙醇清洗沉淀。空气干燥颗粒。

7. 用 TE 缓冲液或水溶解沉淀。

RNA 提取一般在 pH 值低于 7 时进行。在碱性 pH 值下，由于核糖的 2' 位置存在 OH 基团，RNA 更容易被碱性水解降解。 此外，RNA 在酸性 pH 值下倾向于保留在水相中。