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2023/6/27 17:29:52思拓凡Cytiva(原GE生命科学)的预装柱和填料是做蛋白纯化经常会用到的产品,预装柱主要分以下几种
一、吸附式层析(亲和,离子,疏水)通常柱型比较短粗,柱型有HiTrap 1ml(7/25),HiTrap 5ml(16/25),HiPrep 20ml(16/100),HiScreen 4.7ml(7.7/100)几种。
1、HiTrap柱型
HiTrap是常用的1ml和5ml柱型。柱高都是相同的25mm,1ml的柱子内径为7mm,5ml的柱子内径为16mm。1ml和5ml柱型的选择可以根据柱子的载量来选择。通过查找手册可以查到预装柱每ml填料可以结合多少蛋白,5ml的柱子可以结合5倍的蛋白。HiTrap预装柱也可以通过2-3根首尾串联从而增加上样量。
2、HiPrep柱型
HiPrep选用了比HiTRap更大体积的柱型以增加上样量。HiPrep的柱体积为20ml,柱子内径为16mm,高度为100mm。
3、HiScreen柱型
HiScreen柱型的体积为4.7ml,内径为7.7cmm,柱高100mm。主要用于工艺平台的方法优化和方案筛选。柱床高度为10cm,通过串联可以达到20cm。较小的柱型有效降低优化阶段样品的消耗和时间成本,并且在生产中通过放大柱子内径而不改变高度的方法,可以将参数有效放大至大体积工业生产中。
二、分子筛的柱型通常比较瘦长。由于是非吸附式层析,分子筛的上样量一般为柱体积的2%-5%。分子筛的柱型有24ml(10/300),3ml(5/150),3ml(3.2/300),120ml(16/600),320ml(26/600)。
1、高分辨率半制备型24ml(10/300)
10/300为常规纯化中常用柱型。柱体积为24ml,内径为10mm,柱高300mm。推荐上样量为25-500ul。Superdex Increase采用10/300的柱型,9um粒径,在保持较高上样量的同时,具有超高分辨率。
2、高分辨率小规模3.2/300
3.2/300具有和10/300相同的柱高和较小的内径。柱体积为3ml,内径和柱高分别为3.2mm和300mm。推荐上样量范围为4-50ul。采用更小柱体积有利于减少样品和缓冲液的损耗,并且减少样品的稀释。
3、快速筛选5/150柱型
5/150柱型具有更短的柱床高度。柱床体积为3ml,内径和柱高为5mm和150mm。推荐上样量为4-50ul。更短的柱型有利于减少样品和缓冲液的消耗,并且大大减少筛选时间。在几分钟内即可得到有效结果。
4、大体积16/600和26/600
16/600柱体积为120ml,内径和柱高分别为16mm和600mm,最大上样量为5ml。26/600柱体积为320ml,内径和柱高分别为26mm和600mm,最大上样量为13ml。如果上样量比较大,可以考虑这两种柱型。