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ELISA试剂盒操作步骤知多少?

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2023/6/29 10:09:00
  操作步骤
  (一)样品准备
  1.取动物全血按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血、无污染。样品1周内可于2~8℃保存,长期需置-20℃保存。
  2.用样品稀释液将待检血清按100倍稀释(如2μl血清加入198μl样品稀释液中,混匀)。阴、阳性对照不用稀释。
  3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解,然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释。
  (二)检验方法
  1.使用前将试剂盒置室温30分钟,恢复至室温。
  2.取所需用量酶标板条,设空白对照1孔、阴性/阳性对照各2孔,未用的板条尽快密封,2~8℃保存。
  3.空白对照孔加样品稀释液100μl;阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl;样品孔每孔加入稀释后的样品100μl。
  4.混匀,置37℃反应30分钟。
  5.扣去孔内液体,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,重复洗涤5次,拍干。
  6.每孔加酶标记物100μl(空白孔除外)。置37℃反应30分钟。
  7.洗涤,同步骤5。
  8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混匀,37℃避光反应10分钟。
  9.每孔加终止液50μl,混匀,用空白孔调零,于450nm(可用630nm作参比波长)测定各孔吸光值(A值)。

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