【环凯原创】有趣的细菌拉丝试验 — 快速区分革兰氏阳性菌和阴性菌

是否有想知道平板上的分离菌的到底是革兰氏阴性还是阳性菌，却因没有革兰氏染色或没有显微镜或不会革兰氏染色操作而不知所措？或者，革兰氏染色后还不确定标本测试菌是革兰氏阴性还是阳性菌的？

下面给大家介绍个简单又有趣的解决方法 —— 细菌拉丝试验，不需染色剂不需显微镜，一分钟轻松区分革兰氏阳性菌和阴性菌。

此法在1970年Smith^【1】首先报道应用去氧胆酸钠溶液做拉丝试验区分弧菌与非弧菌（如气单胞菌属细菌），初步鉴别霍乱弧菌；1981年Shushan等^【2】和1983年Agbonlahor等^【3】相继应用氢氧化钾溶液做拉丝试验区分革兰氏阳性菌和阴性菌。

目前国内细菌拉丝试验主要也是应用于两个方面：一是用于霍乱弧菌初步鉴别^【4】，二是用于区分革兰氏阳性菌和阴性菌^【5-8】。

区分革兰氏阳性菌和阴性菌的拉丝试验方法^【6】：取一张洗净玻片， 滴加25g/L氢氧化钾水溶液一滴，根据菌落大小，从平板上挑取单个菌落或数个纯培养菌落，置于氢氧化钾滴液中研磨，经15-60秒， 自混悬液中轻轻提起接种环，仔细观察；60秒内混悬物中形成黏液状并可拉成细丝（5mm以上）为阳性（对应是革兰氏阴性菌），60秒混悬物均匀不出现细丝者为阴性（对应是革兰氏阳性菌）。

目前有两种说法，第一种说法是革兰氏阴性菌的细胞壁在稀碱氢氧化钾溶液中容易裂解，裂解后释放出DNA，使氢氧化钾溶液变为粘稠并形成粘丝，反之，稀氢氧化钾对此革兰氏阳性菌无此作用^【5】；第二种说法是与细胞壁化学结构有关，在氢氧化钾作用下革兰氏阴性菌的细胞壁中所含的脂多糖、脂蛋白及脂质被皂化而形成粘稠物，致拉丝试验阳性，而革兰氏阳性菌细胞壁主要成分是粘肽，氢氧化钾不能使其形成粘稠物，故拉丝试验阴性。革兰氏阴性经过氢氧化钾溶液处理后再革兰氏染色镜检，发现菌体细胞壁溶解，呈模糊絮片状，细胞壁有不同程度的损伤，接种适宜培养基上不能生长繁殖，而革兰氏阳性菌无此现象^【6-7】。

其实，这两种说法都是认为与革兰氏阳性和阴性菌细胞壁结构成分有关，所以此法可用于区分革兰氏阳性和阴性菌。但至于粘稠的物质是DNA还是革兰氏阴性菌细胞壁类脂物质被氢氧化钾皂化形成的，要阐明还有待进一步的研究。

拉丝试验区分革兰氏阳性菌和阴性菌的准确性：相关研究报道表明^【6-8】，氢氧化钾拉丝试验结果与革兰氏染色一致，二者符合率为100%。拉丝试验不但能正确区别革兰氏阴性菌和阳性菌，还有助于复核革兰氏染色结果的正确性，也是革兰氏染色质控的有力措施。

但拉丝试验结果也会受到试剂、菌量、菌型等因素影响^【6】，所以为了保证该试验结果的准确，操作时需注意：