一、超氧化物歧化酶(SOD)是一种广泛存在于生物体内的金属酶,作为重要的氧自由基清除剂,能催化超氧化物阴离子发生岐化作用,生成H₂O₂和O₂。SOD不仅是超氧化物阴离子清除酶,也是H₂O₂主要生成酶,在生物抗氧化系统中具有重要作用。HUANG嘌呤及HUANG嘌呤氧化酶反应系统能够产生超氧阴离子(O₂⁻),O₂⁻可还原氮蓝四唑生成蓝色甲臜,产物在560nm处具有特征吸收峰;SOD可清除O₂⁻,从而抑制了甲臜的形成,反应液颜色越深,表明SOD活性愈低,反之活性越高,通过吸光值的变化即可表征SOD的活性。
二、测定过程中所需要的仪器和试剂:可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、可调式移液器、台式离心机、恒温水浴/培养箱和蒸馏水。
三、吸光值测定:将反应液置于1mL玻璃比色皿中测定560nm处吸光值,记为A测定、A对照、A空1、A空2;计算ΔA测定=A测定-A对照,ΔA空白=A空1-A空2。注:空白管1和空白管2只需测定1-2管,每个样本均需设一个对照管。
四、该试剂盒含有所有测定超氧化物歧化酶活性所需的试剂和溶液,使用了基于HUANG嘌呤氧化酶和全新显色试剂的间接分析方法。在该试剂盒中所用的显色试剂的化学及生物化学特性保证了应用的便利性和测试结果在宽范围内的线性。超氧化物歧化酶是负责消除超氧自由基(O2-)的酶,从而可保护细胞免受自由基相关的损伤。他们可催化两个超氧化物自由基歧化为过氧化氢和氧气。