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触手可得的无核酸酶水

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2023/8/1 13:49:07

核酸酶通过减切核酸骨架中的磷酸二酯键来降解DNA和RNA。 虽然有些核酸酶是有用的研究工具,但是通常科学家需要完整的生物样品信息用于PCR,克隆,测序或基因编辑等应用。因此,研究核酸的科学家需要不含核酸酶的试剂和容器。水作为缓冲液和试剂的主要成分,也应该不含有核酸酶。


可是,核酸酶在实验室中普遍存在,它们普遍存在于塑料制品和试剂中,甚至可能来自科学家自己(皮肤,唾液等),它们非常稳定,难以灭活。因此,经常使用DEPC处理来消除它们。


DEPC(焦碳酸二乙酯)是一种有效的非特异性核糖核酸酶抑制剂,用于核糖核酸酶灭活,且已使用了多年。用DEPC对溶液进行化学处理是一种非常有效的方法,但它存在几个缺点:



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图1 DEPC的水解引入杂质 




是否存在可避免以上缺点的制备无核酸酶水的方法呢?经过默克纯水研究人员测试超滤可以作为制备无核酸酶水的替代方法,处理方法方便安全。这个过程使用中空纤维根据其孔径分离污染物。一次性滤头内含标称分子量(NMWL)13 000 Da的聚砜超滤纤维(图2)。


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图2 Biopak®滤头中用于超滤的聚砜中空纤维。


研究人员用超纯水溶解核糖核酸酶A并分成三份:(1)用DEPC处理并高压灭菌;(2)通过Biopak超滤终端进行处理;(3)未处理。 将rRNA加入到每个溶液中,孵育20分钟,然后进行变性琼脂糖凝胶电泳。


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图3 rRNA的凝胶电泳结果,所用的核糖核酸酶溶液分别是DEPC处理、超滤处理与未处理。


图3电泳结果显示当使用超滤过滤核糖核酸酶溶液时,rRNA保持了完整。同时,使用常规DEPC处理核糖核酸酶溶液也能防止rRNA降解。作为对照,当核糖核酸酶溶液未处理时,rRNA被降解。这表明了使用超滤去除核糖核酸酶与通过DEPC处理灭活效果相当。


许多分子生物学应用都需要无核酸酶的水。与耗时又麻烦的DEPC处理方法不同,通过水纯化系统的超滤终端方式获得无核酸酶的水,是一种安全又便捷的方法。这种方法对科研有很多好处:





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