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2023/8/15 11:43:29细胞外基质衍生的基质胶含有多种生长因子。并且它具有支持细胞增殖、迁移和分化的ECM特性,因此广泛应用于体外细胞培养。但此类基质胶成分未知,稳定性较差,物理性质缺乏可控。因此,开发一种兼具ECM功能和合理设计的可控生物材料显得尤为重要。
格拉斯哥大学 Manuel Salmeron-Sanchez 教授的团队在《生物材料》杂志上发表了一篇文章“采用全长纤连蛋白设计的 3D 水凝胶,可隔离并呈现生长因子”。研究人员利用聚乙二醇共价结合全长的纤连蛋白,制备了一种可以富集和控制生长因子的PEG-纤连蛋白水凝胶。并证明水凝胶可以结合血管内生长因子(VEGF)和骨形态发生蛋白(BMP2)促进血管生成,实现骨再生。
FN 通过迈克尔型加成反应与 PEG 网络共价结合,形成 FN 标记的 FNPEG 水凝胶。 FN免疫荧光染色和释放检测结果表明,FN均匀分布在水凝胶网络中,结合稳定。 PEG可以控制FNPEG水凝胶系统的物理和化学性质。随着体系中PEG含量的增加,FNPEG水凝胶的溶胀性能和杨氏模量也显着提高。此外,添加0.5VPM可降解交联剂将增强水凝胶的机械强度。
FN可以随机与生长因子结合,例如通过FNIII12-14与VEGF结合。因此,与PEG相比,FNPEG水凝胶可以有效共聚大量生长因子。研究人员使用荧光标记的 VEGF 来追踪其随时间的释放。将荧光标记的 VEGF 混合到 PEG 和 FNPEG 水凝胶中进行释放实验。 24小时后,PEG释放了所有VEGF,而FNPEG水凝胶保留了50%的VEGF。同时,将PEG和FNPEG水凝胶置于相同浓度的荧光标记VEGF中,测试其结合VEGF的能力。
结果表明,每毫升 FNPEG 水凝胶比 PEG 多结合 2μg VEGF。此外,可降解交联剂VPM的存在不会影响水凝胶与VEGF的稳定结合,表明FNPEG水凝胶可以通过其自身的降解特性来控制生长因子的释放。
PEG和FNPEG水凝胶中HUVEC的存活率没有显着差异。研究人员将接种了HUVEC的微载体封装到FNPEG水凝胶和Matrigel中,并在培养基中添加VEGF,以研究FNPEG水凝胶在3D培养过程中促进管出芽的作用。在含有VEGF的FNPEG水凝胶中,出现了大量与Matrigel类似的血管出芽现象,并且连接的血管芽的面积比Matrigel更多。
研究人员进一步将HUVEC和VEGF直接封装到FNPEG水凝胶中,研究FNPEG水凝胶是否能像Matrigel一样促进三维交换中的血管形成。第1天和第2天,FNPEG水凝胶形成比Matrigel组和含有VEGF的PEG组更宽的血管簇。然而,从第3天开始,FNPEG水凝胶中的血管簇开始分解,表明这些细胞复合物不稳定。需要周细胞、平滑肌细胞和其他类型的细胞来稳定新形成的毛细血管。
研究人员使用更复杂的鸡胚尿囊膜来测试FNPEG水凝胶是否可以促进毛细血管的形成。添加和未添加 VEGF 的 FNPEG 水凝胶鸡胚尿囊膜上毛细血管的分叉和连接数量均显着高于对照组,表明 FNPEG 水凝胶不仅具有持久持续释放 VEGF 的能力,鸡胚尿囊膜在发育过程中产生的尿囊膜也可保留在原位,促进毛细血管生成。然而,有或没有VEGF的PEG水凝胶实验组与对照组之间没有显着差异。进一步证实VEGF在最初的几个小时内从PEG中快速释放,导致VEGF从局部区域相对快速地消失。
研究人员利用成年小鼠构建了骨不连(临界尺寸)半径缺损模型,并证明负载BMP2的FNPEG水凝胶可以促进体内骨骼生长和修复。各组件水凝胶管状支架的骨缺损修复结果显示,随着BMP2的增加,骨生长从FNPEG-到FNPEG+再到FNPEG++增加,FNPEG++组实现骨缺损闭合。番红-O固绿和苏木精组织切片染色结果显示,FNPEG+和FNPEG++ Hydro植入处有大量胶原沉积。