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如何区分各种PCR技术?

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2023/9/8 10:36:16

PCR是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,PCR技术有很多,那么我们应该如何区分各种PCR技术呢?让我们一起来看看吧!

一、普通PCR

PCR是普通PCR,以双链DNA为模板,以dNTP为底物,特异性地扩增双链DNA。然后采用琼脂糖凝胶电泳对产物进行检测,只能做定性分析。

二、实时荧光定量PCR

qPCR和Real-time PCR是实时荧光定量PCR,以cDNA为模板,以dNTP为底物,对扩增出的DNA进行定量分析。实时荧光定量PCR常用的方法:水解探针法和荧光染料法。

三、逆转录PCR

RT-PCR 是逆转录PCR,采用 Oligo(dT) 或随机引物利用逆转录酶反转录成 cDNA,再以 cDNA 为模板进行 PCR 扩增,结果只能定性,不能定量。

四、实时荧光定量逆转录PCR

RT-qPCR是实时荧光定量逆转录PCR,是qPCR+RT-PCR的组合,将总RNA或mRNA逆转录成cDNA后再作为模板,以dNTP为底物,进行qPCR的定量分析。

五、数字PCR

dPCR是数字PCR即三代PCR,是一种能够实现核酸绝对定量的精准检测技术,基于泊松分布原理将核酸样品分配到大量独立、平行的微反应单元(纳升级)中,使每个反应室中平均只有一个拷贝或者没有目标DNA分子,然后加入荧光信号进行扩增,从而实现靶标核酸分子的绝对计数,提高检测灵敏度和准确度。

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