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金属蛋白酶组织抑制因子Elisa试剂盒

德国IBL*，货号：RE54081

德国IBL中国*代理商“深圳科润达生物工程有限公司”竭诚为您服务

预期用途

此试剂盒用于人血浆中TIMP-1的体外定量检测

简介

细胞外基质的蛋白水解在许多生理和病理过程中发挥着重要的作用，其中一关键因素是基质金属蛋白酶（MMP）和其内源抑制剂

多数研究显示，MMP参与了部分肿瘤的发展，如结肠癌，胃癌，肺癌，乳腺癌

组织中的蛋白水解活性受内源性蛋白酶抑制剂调节，zui重要的MMP内源抑制剂就是TIMPs

TIMP-1是一N末端糖基化蛋白。由184个氨基酸组成，分子量为28kDa

TIMP-1在不同的生理过程中对细胞外基质稳态的维持发挥了关键作用，细胞外基质的敏感平衡一旦破坏，将会导致许多病理生理反应，如炎症，慢性退行性疾病和肿瘤的侵袭、转移和血管再生

除了这些MMP抑制活性外，还有一些不是依靠TIMPs而发挥作用的，如抗凋亡过程，刺激细胞增殖和血管再生导致的肿瘤增殖和恶性转化，这时的TIMPs则作为各癌症的阴性预后标记物。TIMP-1成为了目前癌症研究诊断的焦点

实验原理

此实验基于夹心原理。包被板包被了抗TIMP-1多克隆抗体，样品中的TIMP-1特异性结合包被抗体，由HRP标记的鼠二抗分析检测，底物反应催化酶联检测系统，颜色强度与样品中的TIMP-1的量成正比，样品结果可直接从标准曲线上读取

注意事项

1. 试剂仅供体外诊断和专业人士使用。

2. 开始试验前，请仔细阅读说明书，确定所有的事项都已明白。

3. 如果试剂盒有破坏的请与IBL公司或是提交您的投诉单，但自您拿到试剂盒后zui迟不超过一个星期。严重破损的成分不能用于实验，将其保存好直至找到zui终的解决办法。之后，按照*条例将其处理掉。

4. 确认批号和有效期，不要将不同批号的试剂混合，不要使用过期试剂。

5. 遵守实验室规章制度，按规定着装，当必要时带上保护性眼镜。

6. 试剂盒内的试剂包含危险品可能会刺激眼睛跟皮肤，详细见提供的材料和标签。产品的材料安全数据能够从IBL公司主页上下载，也可直接咨询IBL公司获取。

7. 按照相应的国家生物安全管理条理*的方法处理样品和试剂。

8. 避免接触终止液，它可能会刺激和灼伤皮肤。

9. 试剂盒中的所有试剂包括检测过的人血清/血浆对HIV/II，HbsAg和HCV都表现为阴性，但是试剂中会出现此类病毒（HIV/II，HbsAg和HCV）或其他具有感染性的病原体的可能性都不能*被排除。因此，所有的试剂在使用和处理的过程中都应当作潜在生物有害物质进行处理。

贮存和稳定性

试剂盒应当在2~8℃运输和储存，避免高温和阳光直射。准备好的试剂的储存及其稳定性在相应章节已阐明。包被条在封闭的袋子内2~8℃能保存到有效期。

样品采集和贮存

注意：不要使用血清，因为在血清制备过程中，a-粒细胞会不受控制的释放出TIMP-1。TIMP-1只能用血浆检测

血浆（EDTA）

注意静脉穿刺采集全血的常规注意事项。从采集到血液样品的那一刻起到检测时都应保持血液样品的化学整体性。不要使用明显溶血、黄疸的和脂血样品。如果样品出现混浊，则在实验前应当离心以除去所有的微粒物质。
储存	2-8℃	≤-20℃	避免热源和太阳直射，避免反复冻溶。
稳定性	48小时	6个月	避免热源和太阳直射，避免反复冻溶。

试剂盒组成

剂量/数量	标志	成分/部件
1×12×8	MTP	微量滴定板（包被板）可拆，包被了抗-TIMP-1抗体（羊）
1×0.1mL	ENZCONJ CONC	酶联物（101×）浓缩 HRP标记的抗TIMP-1抗体，稳定剂
6×0.5mL	CAL A-F	标准品A-F 浓度为：0,10.2,51,102,204,510ng/ml 即用，包含：TIMP-1，稳定剂
2×0.5mL	Control 1+2	质控品 1+2 即用，包含：TIMP-1，稳定剂浓度/可接受范围见质控单
1×12mL	ASSAYBUF CONC	试验缓冲液，20X 包含：磷酸缓冲液，BSA和Proclin300
1×100mL	WASHBUF CONC	洗涤液，（10×）浓缩包含：磷酸缓冲液，吐温
1×12mL	TMB SUBS	TMB底物液即用，包含：TMB，缓冲液，稳定剂
1×12mL	TMB STOP	TMB终止液即用，包含：0.5M 硫酸
3×	FOIL	粘合金属板（封板片）

实验所需材料但试剂盒未提供

1. 移液器体积：5,20,50,100,1000ul

2. 一次性玻璃试管

3. 混合器

4. 8通道移液器

5. 洗瓶，全自动或半自动洗板机

6. 酶标仪

7. 去离子水或双蒸水

8. 吸水纸，枪头和计时器

操作注意事项

1．样品处理不当或者修改实验步骤都会影响到结果，必须严格按照说明书的步骤进行实验。

2．一旦实验开始，所有步骤必须完整的进行下去，必须确定实验所需的试剂及物品都在适当时间内准备好，实验开始前让试剂和样本都平衡至室温，（18~25℃），试剂和样本在使用之前混匀应避免起泡沫。

3．避免污染试剂，枪头和微孔/管。每个微孔的加样都应该用新的枪头，避免将不同试剂的盖子盖错，用完试剂后要盖好盖，不要重复使用用过的微孔/管、试剂。

4. 有些组分溶液＜250ul，打开瓶盖之前确保溶液全部在瓶底

5．建议对样本进行两次测试，鉴定潜在的吸量错误

6．设计一个合适的包被板布局

7．孵育时间影响结果，所有的孔必须在同样顺序和时间间隔下加样，这里推荐使用8道移液器加样。

8．洗板是非常重要的，不恰当的洗板会导致错误的结果。这里推荐使用洗板机。孵育时不要让孔干燥。小心地弃去试剂，当洗板时应当让孔内装满洗涤缓冲液，并且没有其他残留物留在孔内。

9．湿度会影响包被孔/管。在平衡至室温之前不要开袋。没有使用的板孔应立即用含有干燥剂的可重封小袋重新封紧。

试剂准备

冻干或浓缩成分的准备

稀释溶解	成分		稀释液	比例	备注	贮存	稳定性
10ml	洗涤浓缩液	90ml	去离子水	1:10	充分混匀	2-8℃	4周
1ml	试验缓冲浓缩液	19ml	去离子水	1:20	充分混匀	2-8℃	1周
20ul	酶联物浓缩	2ml	稀释的试验缓冲液	1:101	混匀，避免产生气泡	现配现用

样品稀释

病人样品			比例	备注
血浆（EDTA）	常规稀释	稀释的试验缓冲液	1:51	e.g. 10 µL + 500 µL

实验步骤

1. 吸取50ul的标准品，质控品和病人样品于相应的孔内

2. 每孔加入50ul的稀释的酶联物，盖板，小心振荡微孔板

3. 室温下（18-25℃）孵育90min

4. 移去盖板，弃去废液，每孔加入250ul的洗涤液洗板5次，吸水纸上拍干

5. 每孔加入100ul的TMB底物液

6. 室温下孵育30min

7. 每孔加入100ul的终止液，小心混匀，液体颜色由蓝色变为黄色

8. 加入终止液后15min 内酶标仪上读数

计算结果

在半对数坐标纸上或自动计算的方法，以标准品的OD值（Y轴，线性）对其浓度（X轴，对数）做一条标准曲线。使用三次回归、四参数或双对数曲线方程可以得到更好的标准曲线。在推算标准曲线时，应当充分利用好每一个标准品数值（明显逸出的数值应当被忽略，再使用更合理的数值代替它）。样品的浓度可以从标准曲线上直接读取

将稀释了的样品结果乘以稀释因子即可得到其相应的结果

附：采用全自动酶标仪检测，只需检测前设置好酶标仪的相关参数，如坐标参数（线性，半对数）和计算方式参数（三次回归、四参数或双对数曲线方程），即可直接得到结果

正常值

此检验结果不能作为治疗结果的*原因，还应结合临床观察和诊断试验

健康人群EDTA血浆中的TIMP-1的值低于100ng/ml（95%：100ng/ml；90%：80ng/ml）

我们建议每个实验室都应建立自己的正常值范围

检验方法的局限性

样品的采集对试验结果有着重要的影响，请仔细阅读“样品采集和贮存”的部分

以下物质低于下面所述浓度，其实验结果都会不明显