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悬浮细胞培养的操作步骤与注意事项有哪些?

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2023/10/11 10:19:09

悬浮培养指的是一种在受到不断搅动或摇动的液体培养基里,培养单细胞及小细胞团的组织培养系统,那么悬浮细胞培养的操作步骤与注意事项有哪些呢?让我们一起来看看吧!

一、步骤

1. 将准备好的冻存细胞放入37℃水浴中解冻。

2. 用70%乙醇对顶端进行消毒,用吸管将细胞转移到含有5mlwan全MEM-10培养基的25cm2组织培养瓶中,轻轻摇动培养瓶,使细胞均匀分布于培养瓶中,放入5%CO2加湿培养箱中37℃培养过夜。

3. 将培养基吸出,用0.5ml37℃的胰酶/EDTA覆盖细胞,消化30~40s。

4. 加入10ml旋转瓶wan全培养基-5,并将细胞转移至50ml的离心管中。室温1800g离心5min,弃上清。

5. 将细胞沉淀悬浮在5ml的旋转瓶wan全培养基-5中,上下吹打,将细胞团打散。

6. 在100ml或200ml通气旋转瓶中加入50ml旋转瓶wan全培养基-5,并将细胞悬液转移到瓶中。

7. 取出1ml细胞悬液,用血细胞计数器进行细胞计数。加入适量的旋转瓶wan全培养基-5,使细胞密度为(3~4)×105细胞/ml。将细胞放入无CO2培养箱,37℃旋转培养。

8. 随后的两天让细胞继续生长,并且每天对细胞进行计数,加入适量的旋转瓶wan全培养基-5以维持(3~4)×105细胞/ml的细胞密度。

9. 取1ml的细胞悬液,用血细胞计数器对细胞进行监测。

10. 当细胞密度达到(4~5)×105细胞/ml时,隔天或每天用培养基将细胞稀释至1.5×105或2.5×105细胞/ml。

11. 分别将装有50ml或100ml细胞悬液的100ml或200ml通气旋转瓶放入37℃无CO2培养箱旋转培养。每天或隔天传代。

二、注意事项

由于有些细胞是不能被养活的,所以需要高的初始密度。

更多有关悬浮细胞培养的操作步骤与注意事项,请联系北京百奥创新科技有限公司:



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