1、溶解氧
冬季所取的样品由于试验温度设在20℃，使得溶解氧过饱和，夏季所取的样品在20℃时溶解氧可能欠饱和。在BOD5测定前应对这些样品进行搅拌和曝气，以便使溶解氧调节到20℃饱和点左右。
2、pH为20℃放置24～36小时的未经处理新鲜生活污水的上清液。
在下次实验中，若要使用以前测定过的水样作为接种液应经滤纸过滤，这种滤液在冷藏（约20℃）、避光的条件下保存，一般在二个月内可能是有效的。
将准备测定的样品放入培养瓶中，使用吸管将2～5滴接种液加入到样品中（根据样品量）。按步骤测定BOD5，五日后获得的读数可以作为试验样品真实的BOD5值。
注意：当使用上述方法接种时。不必校正接种的BOD5读数。因为所加入接种液的量相对水样量来说太少，不致于影响BOD5的读数。如果上述方法未能引起水样中有机物的生物分解，可增加所加入接种液的量。如果由于接种液的加入影响了BOD5测定仪的读数，可将接种液与样品同时实验进行平行样测定。
接种量常取1％，5％，10％三种。
应调节试验水样的pH值为6.7～7.5（最佳点为pH7.2），BOD5读数下降可能是由于正在试验样品的pH值超出了这个范围，含有大量酸或碱的样品，BOD5读数可能会低于实际含量。
酸性或碱性水样应用适当浓度的Na0H或H2S04中和。
如果工业废水中含有酸性或盐的氧化物，或者需要高倍稀释，对标准五日BOD5测定，可使用pH7.2的磷酸缓冲液作为稀释剂。
3、温度
实验时将搅拌器放置在20℃±１℃的培养箱中。BOD的测定也能超出这一温度范围，例如，在35℃或37℃时，测定BOD所需要的时间可以分别缩短为2.5天或34小时，其测定结果与五日20℃相似。提高温度所获得的BOD值与五日20℃条件下测定的结果有很好的相关性。
如果在采样时样品温度超过20℃，或样品温度不足20℃，可将样品放在培养箱中恒温。在样品测定前要求对样品进行处理。
4、BOD5的稀释
仪器测定范围为0～1000mg/L。如果试验样品的BOD5估计值高于1000mg/L可用稀释水稀释样品。所加入的稀释水也应保持为20℃，并曝气使氧达到饱和，如需要若干份相同的样品试验时，应稀释足够量的原水样，并从稀释样中取出与量程对应的体积。例如，当试验原水样稀释两倍时，稀释倍数为2；当原水样按1∶10稀释时，则稀释倍数为10。
5、BOD5的接种
什么是接种
BOD5实验要求水样含有供生物氧化的有机物和适量的氧化有机物的需氧细菌，以及吞食有机物和增进需氧细菌生长的其他微生物。如果水样中根本没有或几乎没有这类微生物，就必须对水样按一定比例加入这类微生物溶液。这个过程应称之为接种。
与生活污水不同，工业废水可能不含有足够量的细菌以供样品中所含有机物*的生化分解，如果所测定的样品就是这种废水，应加入接种溶液。
6、BOD5的接种方法
制备接种溶液
用于接种的溶液
