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传代方法的概述

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2023/10/26 15:10:57

传代方法概述

1.消化传代:

        弃去培养基,PBS润洗一次后加入适量胰酶晃匀(以盖住细胞表面为宜),放入培养箱消化。细胞呈斑片状时加入等体积新鲜全培养基终止消化。吹打细胞后转移悬液至洁净离心管,600g离心5分钟。弃去上清,用新鲜培养基重悬细胞至培养瓶,补足培养液体积,移入培养箱培养。

2.直接传代:

         用吸管吸取细胞悬液的1/2~1/4至另一瓶中;加入适量的新鲜培养基,补足培养液体积,培养箱继续培养。

3.离心传代:

         将细胞悬液转移至离心管内,600 g 离心 5 min,弃去上清。使用新鲜的培养基重悬细胞至新的培养瓶,补足培养液体积,培养箱继续培养。

 

细胞冻存注意事项

细胞冻存步骤:

使用上述传代步骤至离心后,弃去培养基,用600μL~1mL冻存液重悬细胞后,转移细胞至冻存管。

无血清冻存液可直接冻于-80,否则采取梯度降温法冻存。

含血清冻存液成分:20%FBS、10%DMSO、70%1640培养液

 

细胞冻存需注意:

 

● 细胞数量过少可能导致复苏困难,应至少有5*105。

 

● 冻存时应处于对数生长期,状态不佳的细胞复苏困难。

 

● 尽量采用梯度降温并使用梯度降温盒。

 

● 冻存的细胞不可直接移入液氮,应-80冻存超过6小时后再液氮冻存。

 

● 冻存和复苏的时间间隔不宜过短,不可小于三天。


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