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2023/11/2 11:42:40细胞
培养基
细胞培养基是盐、碳水化合物、维生素、氨基酸、代谢前体、生长因子、激素和微量元素的复杂混合物。不同的细胞系培养的成分要求不同,从而产生了不同类型的培养基。
经典的商品化培养基有很多种,其中DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12都是应用广泛的培养基。其他如:M199 、IMDM 、L15培养基等也用于某些细胞的培养。
常用培养基
01
MEM培养基
是一种添加了营养物的基础必需培养基,仅含有12种必需氨基酸、L-谷氨酰胺和8种维生素,含糖量为1g/L。MEM是一种最基础、最、常用的细胞培养基,主要应用于贴壁细胞的培养,在添加血清后,可用于培养多种单层生长的细胞,如成纤维细胞。配方修改后的的a-MEM则能广泛应用于各种哺乳动物悬浮和贴壁细胞培养。
02
DMEM培养基
氨基酸含量是MEM的两倍,维生素含量是MEM的4倍,以及硝酸铁、丙酮酸钠和一些补充氨基酸。此外,DMEM分为低糖型和高糖型,葡萄糖含量分别为1g/L和4.5g/L。低糖适于依赖性贴壁细胞培养,特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养;高糖更适合高密度悬浮细胞培养。
03
IMDM细胞培养基
Guilber和Iscove将Dulbecco' Medium改良为Iscove's Medium,用于培养红细胞和巨噬细胞前体。此种培养液含有硒、额外的氨基酸和维生素、丙酮酸钠和HEPES。并用硝酸钾取代了硝酸铁。IMDM还能够促进小鼠B淋巴细胞,LPS刺激的B细胞,骨髓造血细胞,T细胞和淋巴瘤细胞的生长。IMDM为营养非常丰富的培养液,因此可以用于高密度细胞的快速增殖培养。
04
DMEM/F12培养基
DMEM和F12的1:1混合物,能够在低血清条件下支持多种哺乳动物细胞的培养,在此培养基中成功培养的细胞包括:MDCK、神经胶质细胞、成纤维细胞和人内皮细胞等。
05
L15 细胞培养基
L-15培养液适用于快速增殖瘤细胞的培养,用于在CO2缺乏的情况下培养肿瘤细胞株。此培养液采用磷酸盐缓冲体系,氨基酸组成进一步改良,并由半乳糖替代了葡萄糖。
06
RPMI-1640细胞培养基
Moore等人于1967年在Roswell Park Memorial Institute研制,针对淋巴细胞培养设计,含BSS+21种氨基酸+维生素11种等。现也用于悬浮细胞培养,如哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞,杂交瘤细胞的培养,其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞以及HCT-15上皮细胞等均可参考使用。
07
McCoy’s 5A培养基
广泛用于多种原代细胞及细胞系的培养,如来源于骨髓、皮肤、脾脏、肾脏和肺等组织的哺乳动物原代细胞。
08
M199细胞培养基
1950年Morgan等设计的具有确定化学成分的细胞培养液,即M-199。除BSS外,含有53种成分,为全面培养基,主要用于鸡胚成纤维细胞培养。此培养液必须辅以血清才能支持长期培养。M-199可用于培养多种种属来源的细胞,并能培养转染的细胞。现广泛用于病毒学、疫苗生产。
09
Ham 's F-12K培养基
用于支持原代细胞的生长和分化。F-12K增加了氨基酸、丙酮酸、生物素、钙、镁、腐胺和酚红的含量。
培养系统的主要成分
培养基含有维持可培养微生物所需的营养基质;除此之外,培养基中还添加了许多不同的成分,从而使培养基可以选择培养或不培养某些微生物。培养基设计中的每种成分执行特定的功能,包括:
葡萄糖:用于细胞能量代谢。
CO2:细胞需要少量的二氧化碳来维持生长。
酚红:用于监测培养基的pH值。
非必需氨基酸NEAA
L-谷氨酰胺:几乎是所有哺乳动物和昆虫细胞所必需的氨基酸,用于合成蛋白质,参与核酸代谢。
丙酮酸钠:丙酮酸是糖酵解过程中的中间有机酸代谢物,可以轻易地进出细胞,可以为合成代谢过程提供能量来源和碳骨架。
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